Heparin Agarose 6FF是一种新型亲和层析介质，是将肝素偶联到交联琼脂糖凝胶过滤层析介质上。肝素是一种含硫酸酯的酸性多糖，能和抗凝血因子Ⅲ、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干扰素、核酸结合蛋白、限制内切酶、凝血酶及类凝血酶等生物大分子结合，因此本产品可应用于上述产品的分离纯化，同时产品基团脱落少，使用寿命长，操作方便。

 

产品性质

基质	高度交联的琼脂糖凝胶
配基	肝素
配基密度	>5 mg/mL
粒径	45-165 µm
载量	>3 mg抗凝血因子Ⅲ（ATⅢ）/mL基质
耐压流速	250-400 cm/h（在0.1 MPa）
耐热性	121℃，0.02 M NaH2PO4 pH7.5，30 min，5次
PH稳定性	4~10（长期）；3~13（短期，CIP）
化学稳定性	在常用水相溶液中稳定：0.1M氢氧化钠；0.05M乙酸钠；8M尿素；6M盐酸胍；非离子去污剂；10%丙三醇
储存缓冲液	20%乙醇+0.05 mol/L乙酸钠缓冲液，4~8℃

 

运输和保存方法

1.常温运输，避免日晒、雨淋、重压。

2.密封保存在4~8℃（保存溶液为20%乙醇+0.05mol/L乙酸钠缓冲液）干燥、通风、清洁处，不可冷冻。

3.有效期5年。

 

注意事项

1.该介质从冷室或冰箱中取出后最好在室温下恢复到室温，然后缓慢摇匀后装柱，以免产生气泡影响柱效。

2.吸附：20 mmol/L~50 mmol/L，pH7.4~8.0的缓冲液，为避免离子交换的干扰，缓冲液可适当加50 mmol/L~100 mmol/L NaCl，最常用的为Tris-HCl缓冲溶液。

3.上样样品必须与平衡柱子缓冲液的 pH、电导相同。

4.洗脱过程中应严格控制流速，且勿过快。

5.加样及整个洗脱过程中，严防柱面变干。

6.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

7.本产品仅作科研用途！

 

使用方法

1 装柱 

装柱按照标准操作规程操作。必须保证每种材料都处于工作温度，凝胶装柱前需要脱气。

2 平衡

用2～5个柱床体积的初始缓冲溶液进行平衡，直至pH和电导率保持不变。常用的缓冲液为pH 7.4～8.0的0.02 mol/L～0.05 mol/L的Tris-HCl或PBS缓冲液。

3 上样

样品的预处理：样品需先用0.45 μm滤膜过滤，然后上样，以免堵塞层析柱。上样量根据样品的性质和层析介质的量进行选择，也可通过线性实验找到最佳上样量。

4 洗脱

可通过改变离子强度来达到洗脱效果，一般可在pH7.4～8.0的缓冲液中加0.2～2 mol/L NaCl 进行，也可改变 pH 值来进行洗脱。一般洗脱方式有恒定洗脱、梯度洗脱、阶跃洗脱，推荐使用梯度洗脱。

5 在位清洗

1）去除因离子交换作用吸附的蛋白：用2 mol/L NaCl溶液反向清洗2～3个柱床体积。

2）去除强疏水性蛋白和脂质等：用70%乙醇或者30%异丙醇反向清洗4个柱床体积。

6 再生

先用0.1 mol/L Tris-HCl pH7.0缓冲液洗3个柱床体积，然后用0.1 mol/L NaOH（含2 mol/L NaCl）洗3个柱床体积，最后用20%乙醇溶液洗3个柱床体积。经常用酸碱洗填料会使填料的吸附能力下降，所以清洗要尽量缩短时间。  

                                          HB220606