Heparin Agarose 6FF是一种新型亲和层析介质,是将肝素偶联到交联琼脂糖凝胶过滤层析介质上。肝素是一种含硫酸酯的酸性多糖,能和抗凝血因子Ⅲ、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干扰素、核酸结合蛋白、限制内切酶、凝血酶及类凝血酶等生物大分子结合,因此本产品可应用于上述产品的分离纯化,同时产品基团脱落少,使用寿命长,操作方便。
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产品性质
基质 |
高度交联的琼脂糖凝胶 |
配基 |
肝素 |
配基密度 |
>5 mg/mL |
粒径 |
45-165 µm |
载量 |
>3 mg抗凝血因子Ⅲ(ATⅢ)/mL基质 |
耐压流速 |
250-400 cm/h(在0.1 MPa) |
耐热性 |
121℃,0.02 M NaH2PO4 pH7.5,30 min,5次 |
PH稳定性 |
4~10(长期);3~13(短期,CIP) |
化学稳定性 |
在常用水相溶液中稳定:0.1M氢氧化钠;0.05M乙酸钠;8M尿素;6M盐酸胍;非离子去污剂;10%丙三醇 |
储存缓冲液 |
20%乙醇+0.05 mol/L乙酸钠缓冲液,4~8℃ |
运输和保存方法
1.常温运输,避免日晒、雨淋、重压。
2.密封保存在4~8℃(保存溶液为20%乙醇+0.05mol/L乙酸钠缓冲液)干燥、通风、清洁处,不可冷冻。
3.有效期5年。
注意事项
1.该介质从冷室或冰箱中取出后最好在室温下恢复到室温,然后缓慢摇匀后装柱,以免产生气泡影响柱效。
2.吸附:20 mmol/L~50 mmol/L,pH7.4~8.0的缓冲液,为避免离子交换的干扰,缓冲液可适当加50 mmol/L~100 mmol/L NaCl,最常用的为Tris-HCl缓冲溶液。
3.上样样品必须与平衡柱子缓冲液的 pH、电导相同。
4.洗脱过程中应严格控制流速,且勿过快。
5.加样及整个洗脱过程中,严防柱面变干。
6.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
7.本产品仅作科研用途!
使用方法
1 装柱
装柱按照标准操作规程操作。必须保证每种材料都处于工作温度,凝胶装柱前需要脱气。
2 平衡
用2~5个柱床体积的初始缓冲溶液进行平衡,直至pH和电导率保持不变。常用的缓冲液为pH 7.4~8.0的0.02 mol/L~0.05 mol/L的Tris-HCl或PBS缓冲液。
3 上样
样品的预处理:样品需先用0.45 μm滤膜过滤,然后上样,以免堵塞层析柱。上样量根据样品的性质和层析介质的量进行选择,也可通过线性实验找到最佳上样量。
4 洗脱
可通过改变离子强度来达到洗脱效果,一般可在pH7.4~8.0的缓冲液中加0.2~2 mol/L NaCl 进行,也可改变 pH 值来进行洗脱。一般洗脱方式有恒定洗脱、梯度洗脱、阶跃洗脱,推荐使用梯度洗脱。
5 在位清洗
1)去除因离子交换作用吸附的蛋白:用2 mol/L NaCl溶液反向清洗2~3个柱床体积。
2)去除强疏水性蛋白和脂质等:用70%乙醇或者30%异丙醇反向清洗4个柱床体积。
6 再生
先用0.1 mol/L Tris-HCl pH7.0缓冲液洗3个柱床体积,然后用0.1 mol/L NaOH(含2 mol/L NaCl)洗3个柱床体积,最后用20%乙醇溶液洗3个柱床体积。经常用酸碱洗填料会使填料的吸附能力下降,所以清洗要尽量缩短时间。
HB220606