背景描述
蛋白纯化是将目标蛋白从实验样本的总蛋白中分离出来，同时仍保留目的蛋白的生物学活性及化学完整性。在构建载体阶段，除了一些必要的表达元件，还需要考虑密码子优化以及标签的选择。选择合适的标签不但有利于蛋白的纯化，促进蛋白的可溶性，同时也不能影响蛋白的结构功能和下游应用。以下重点介绍GST、MBP标签。
表1 .GST、MBP标签介绍
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标签 |
大小（kD） |
功能 |
是否切除 |
标签切割酶 |
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GST |
26 |
增强蛋白可溶性，提高蛋白表达量，屏蔽毒性蛋白。仅能纯化可溶性蛋白，如果蛋白不可溶，很难用变性的方法纯化。 |
标签较大，可能会影响蛋白质的功能和下游实验；需根据下游应用考虑是否切除，如果要去除GST融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。 |
3C蛋白酶/PSP |
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MBP |
42 |
增强蛋白可溶性（尤其是真核蛋白）和正确折叠，提高蛋白表达量和蛋白稳定性；屏蔽毒性蛋白 |
标签较大，对蛋白的结构/功能会有一定影响，需考虑切除，如果要去除MBP融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。 |
Factor Xa、EK |
克隆过程中构建相应的氨基酸识别序列，即可保证后续可通过合适的蛋白酶对GST、MBP融合蛋白标签进行切除。
GST标签蛋白亲和纯化介质
GST标签蛋白亲和层析是利用GST 融合蛋白与固定的谷胱甘肽(GSH)通过硫键共价亲和，通过GSH交换洗脱的原理来进行纯化。该纯化中，凝胶手臂上通过硫键结合一个谷胱甘肽，然后利用谷胱甘肽与谷胱甘肽巯基转移酶（即GST-tag）之间酶和底物的特异性作用力，使得带GST标签的融合蛋白能够与凝胶上的手臂谷胱甘肽结合，从而将带标签的蛋白与其他蛋白分离开。谷胱甘肽通常有氧化型GSSG和还原型 GSH，当我们使用GSH洗脱时，GSH会与凝胶上的谷胱甘肽竞争结合融合蛋白，从而将目标蛋白洗脱。
GSTSep Glutathione Agarose Resin是一种GST标签蛋白纯化树脂，结构上以6%琼脂糖凝胶为基质，通过12个原子的间隔臂，用化学方法共价结合还原型谷胱甘肽制作而成。该设计使树脂的纯化效率得到了较大提高，使其每毫升介质可承载>20 mg GST融合蛋白。本品特异性好，性价比高，可以一步纯化各种表达系统中谷胱甘肽-S-转移酶、谷胱甘肽依赖性蛋白和谷胱甘肽重组衍生物。
表2.翌圣GST纯化产品选购指南
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产品货号 |
20507ES |
20508ES |
20509ES/20510ES |
20562ES |
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英文名称 |
GSTSep Glutathione Agarose Resin |
GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF |
GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 1 mL / 5 mL |
GSTSep Glutathione MagBeads |
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中文名称 |
谷胱甘肽琼脂糖树脂（用于GST标签蛋白纯化) |
谷胱甘肽高速纯化树脂（用于GST标签蛋白纯化) |
GST标签蛋白纯化预装柱1 mL/5 mL |
GST标签蛋白纯化 磁珠 |
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基质 |
交联的6% 琼脂糖凝胶 |
高度交联的4% 琼脂糖凝胶 |
高度交联的4% 琼脂糖凝胶 |
磁性琼脂糖微球 |
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耐压 |
0.1 MPa, 1 bar |
0.3 MPa, 3 bar |
0.3 MPa, 3 bar |
N/A |
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载量 |
＞20 mg GST 蛋白（40 kDa）/mL基质 |
＞10 mg GST 蛋白（40 kDa）/mL基质 |
5-10 mg GST标签融合蛋白/mL磁珠 |
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应用 |
载量高、基质的耐压一般，适合孵育法、重力柱小量纯化，推荐实验室规模客户使用 |
载量稍低、基质的耐压性高，搭配蛋白纯化仪可以用于工业大规模蛋白的纯化，更容易放大规模 |
载量最低，通过磁性分离快速便捷地进行蛋白纯化 |
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附：GSTSep Glutathione MagBeads（Cat#20562ES）产品特点
1、通过磁性分离方式直接从生物样品中一步纯化出高纯度的目标蛋白，极大地简化纯化工艺和提高纯化效率，适合科研和工业领域便捷地进行GST融合蛋白的纯化。
2、 使用该磁珠进行GST Pull-down实验，由于磁性分离不需要多次离心和较长的孵育时间，与传统的层析法相比，操作更简单、快速和自动化
MBP标签蛋白亲和纯化介质
MBPSep Dextrin Agarose Resin是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白（MBP）标签蛋白的亲和层析介质，MBP可促进连接蛋白的正确折叠，增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF可以一步纯化MBP融合蛋白，结合的融合蛋白可以用10 mM麦芽糖进行温和洗脱，保护了目的蛋白的活性，MBP融合部分后续可用位点特异性蛋白酶切除。
表3.翌圣MBP纯化产品选购指南
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产品货号 |
20515ES |
20516ES/20517ES |
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英文名称 |
MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF |
MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 1 mL / 5 mL |
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中文名称 |
MBP标签蛋白高度交联纯化树脂 |
MBP标签蛋白纯化预装柱，1 mL/5 mL |
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基质 |
高度交联的6%琼脂糖凝胶 |
高度交联的6%琼脂糖凝胶 |
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配体 |
糊精 |
糊精 |
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耐压 |
0.3 MPa, 3 bar |
0.3 MPa, 3 bar |
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载量 |
＞10 mg MBP 蛋白（80 kDa）/mL基质 |
＞10 mg MBP 蛋白（80 kDa）/mL基质 |
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应用 |
适合孵育法、重力柱小量纯化，推荐实验室规模客户使用。其耐压骨架，也可搭配蛋白纯化仪用于工业大规模蛋白的纯化，更容易放大规模 |
预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA等，方便客户操作 |
测试数据
产品信息
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产品定位 |
产品名称 |
货号 |
规格 |
目录价/元 |
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GST标签蛋白纯化 |
GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽琼脂糖树脂（用于GST标签蛋白纯化) |
10 mL /50 mL/ 100 mL/ 1000 mL |
928/3848/6898/48686 |
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GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF 谷胱甘肽高速纯化树脂（用于GST标签蛋白纯化) |
10 mL /50 mL/ 100 mL/ 1000 mL |
1238/4568/7928/54686 |
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GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 1 mL GST标签蛋白纯化预装柱, 1 mL |
1 mL/ 5x1 mL |
328/1348 |
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GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 5 mL His标签蛋白纯化预装柱, 5 mL |
5 mL/ 5x5 mL |
938/3928 |
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GSTSep Glutathione MagBeads His标签蛋白纯化磁珠 |
1 mL /5 mL/ 25 mL |
285/625/ 1565 |
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MBP标签蛋白纯化 |
MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF MBP标签蛋白高度交联纯化树脂 |
5 mL /25 mL |
858/2958 |
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MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 1 mL MBP标签蛋白纯化预装柱1 mL |
1 mL/ 5x1 mL |
358/1258 |
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MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 5 mL MBP标签蛋白纯化预装柱5 mL |
5 mL/ 5x5 mL |
1238/3958 |
