Plasmid Agarose HP 亲和层析介质是一种新型高度交联的亲硫芳香族琼脂糖层析介质，用于纯化超螺旋DNA，广泛应用于基因治疗和DNA 疫苗的开发应用。该层析介质具有高流速、低反压、非特异性吸附低、良好的亲水性、化学稳定性和机械性特点，方便进行规模放大，可缩短生产时间，提高生产效率。

 

产品性质

基质（Matrix）	高度交联的琼脂糖凝胶
配基（Ligand）	巯基吡啶
配基密度（Ligand density）	27–50 µmol/mL
粒径（Bead size）	36-44 µm
载量（Capacity）	＞3 mg/mL基质
耐压（Tolerance Pressuremax）	0.3 MPa
最大流速（Maximum velocity）	220 cm/h
PH稳定性(PH stability)	3~13（长期），2~14（CIP，短期）
化学稳定性（Chemical stability）	在以下液体中稳定：所有常用的水相缓冲液；1mol/L 氢氧化钠；70% 乙醇；40%异丙醇；1M 醋酸
储存缓冲液（Buffer）	20%乙醇，4~30℃

 

运输和保存方法

1.常温运输，避免日晒、雨淋、重压。

2.密封保存在 4~30℃（保存溶液为 20%乙醇）干燥、通风、清洁处，不可冷冻；用过的柱子保存在 4~8℃，20%乙醇溶液中。

3.有效期5年。

 

注意事项

1.柱的选择：从理论上说，只要柱足够长，就可以获得理想的分辨率，但由于层析柱流速同压力梯度有关，柱长增加使流速减慢，峰变宽，分辨率降低；柱的直径增加，使液体流动的不均匀性增加，分辨率明显下降。

2.纯化过程样品与层析介质必须彻底平衡后，才能进行柱层析。

3.所装的柱床必须表面平整，无沟流及气泡，否则应重装。

4.洗脱过程中应严格控制流速，且勿过快。

5.加样及整个洗脱过程中，严防柱面变干。

6.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

7.本产品仅作科研用途！

 

使用方法

1 装柱 

装柱按照标准操作规程操作。必须保证每种材料都处于工作温度，凝胶装柱前需要脱气。

2 平衡

使用2~5倍柱床体积的上样平衡液平衡柱子，务必使流出液的电导和pH 同上样缓冲液的 电导和pH完全一致。平衡液是含高浓度硫酸铵的Tris缓冲溶液，推荐缓冲液：2 M（NH₄）₂SO₄，10 mM EDTA，100 mM Tris-HCl，pH 7.5。

3 上样

1）样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。

2）一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。

4 洗脱

常用低浓度的硫酸铵溶液（1.7 M）加0.3 M氯化钠溶液洗脱。

推荐洗脱液：100 mM Tris-HCl，1.7 M（NH₄）₂SO₄，10 mM EDTA, pH 7.5 + 0.3 M NaCl。 

5在位清洗

1）对于以离子键结合上去的蛋白，可用0.5~1倍柱床体积的2 M NaCl去除。

2）对于沉淀蛋白、疏水性结合的蛋白或脂类，一般先用1 mol/L NaOH 洗脱5倍以上柱体积，然后用结合蛋白时的平衡液洗到平衡即可。

3）对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用4~10倍柱床体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，需注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。

6再生

一般可用 100 mM Tris, 10 mM EDTA 洗脱5倍以上柱体积，然后用结合蛋白时的平衡液洗到平衡即可。  

                                          HB220524