一步完成gDNA去除与反转录,远离污染和降解风险!

——Hifair® AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix for qPCR

常见的gDNA消化去除通常在正式反转录步骤之前,加入gDNA消化去除组分后,需在特定温度下反应一段时间,反应冷却后再加入相关的反转录组分进行反转录,步骤多且耗时通常在半小时左右。

小翌今天给大家带来一款快速反转录预混液,gDNA去除和反转录一步完成,且只要5分钟,“咻”的一下,就可拿到想要的cDNA啦!

 

 
 

 

在检测基达水平时,RNA样品中的基因组DNA(gDNA)残留是一个潜在的风险。gDNA可能会与目的RNA共同扩增,从而产生假阳性的现象,例如Ct值偏小、Ct值波动以及熔解曲线双峰。

▲ Ct值偏小/Ct值波动

 

如何避免RNA中残留的gDNA带来的干扰呢?通常情况下,我们可以选用带gDNA去除的RNA提取试剂获取高质量的RNA或是针对提取的RNA在反转录时进行gDNA消化去除处理。

 

 

 
产品名称
 

Hifair® AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix for qPCR(Cat #11151ES)

 

 

 
产品特点
 
 

一步完成:一步完成gDNA去除和反转录;
快速反应:消化&反转仅需5分钟;
高效合成:可保证100 pg RNA反转录;
产物稳定:cDNA产物可长久稳定保存。

 

 

 
产品性能
 
 
反转录产量高
 
 

图. 以人293T细胞RNA为模板,分别检测三种基因。品牌A、品牌B、品牌C均为一步gDNA去除&反转录试剂。测试结果显示,在1 μg和10 ng Total RNA 投入下,11151ES反转录的产量均优于其他品牌,Ct值更小。(配套测试用荧光定量试剂为11184ES)

 

图. 以拟南芥RNA为模板,品牌A、品牌B、品牌C均为一步gDNA去除&反转录试剂。测试结果显示,在1 μg和10 ng Total RNA 投入下,11151ES反转录的产量均优于其他品牌,Ct值更小。(配套测试用荧光定量试剂为11184ES)

 

 
优异的灵敏度
 
 

图. 以人293T细胞RNA为模板,扩增30%GC、50%GC、60%GC和70%GC的基因。分别投入100 pg、1 ng、10 ng、100 ng、1 μg的Total RNA进行反转录并进行荧光定量检测。结果显示,11151ES可满足100 pg-1 μg RNA的反转录。(配套测试用荧光定量试剂为11184ES)

 

 
cDNA产物稳定性好
 
 

图.以人293T细胞RNA为模板进行反转录,将获得的cDNA产物进行反复冻融,分别冻融10次、20次、30次。测试结果显示11151ES反转录得到的cDNA产物在30次反复冻融处理后,仍保持高度的稳定性,Ct值差异不大。(配套测试用荧光定量试剂为11184ES)

 

图. 以人293T细胞RNA为模板进行反转录,将获得的cDNA产物在-20℃、4℃、25℃和37℃的温度条件下放置7天。测试结果显示11151ES反转录得到的cDNA产物在不同温度下存储7天,仍保持高度的稳定性,Ct值差异不大。(配套测试用荧光定量试剂为11184ES)

 

 

试剂盒稳定性好

 
 

图. 以人293T细胞RNA为模板,将分别在-20℃、4℃和37℃的温度条件下放置3天和7天的试剂盒进行反转录。测试结果显示不同温度不同时间放置下的11151ES反转录结果差异不大,试剂盒具有良好的稳定性。(配套测试用荧光定量试剂为11184ES)

 

 
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方法

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