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Hifair® AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (DNA digester plus)
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产品介绍

Hifair® AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)是Hifair® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)的升级版,与前代Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase相比,本产品具有更强的残留物耐抑制性、更快的逆转录速度以及更高的逆转录产量,适用于动物、植物以及微生物RNA的逆转录反应。其中的gDNA digester Mix -V2的残留DNA消化能力大幅提升,可消化达1000 ng的DNA,更放心地避免了RNA模板中残留的DNA污染,保证后续结果更加可靠。Hifair® AdvanceFast SuperMix含有逆转录反应所需的所有组分,只需加入RNA模板和RNase-free H2O即可进行逆转录反应,并同时终止gDNA digester的作用,保证cDNA的完整性。

本产品逆转录产物适用于染料法和探针法qPCR,不适用于后续基因克隆等长片段扩增,如果需要,推荐翌圣Hifair® AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit (Cat#11149ES、Cat#11150ES)进行高效逆转录。

产品组分

组分编号组分名称11155ES1011155ES60
11155-AHifair® AdvanceFast SuperMix60 μL600 μL
11155-BgDNA Digester Mix -V220 μL200 μL
11155-CRNase free H2O200 μL1 mL×2


产品特色
  • 快速简单:反转录时间5分钟,总计7分5秒
  • 高效合成:cDNA得率更高,Ct值更小
  • 高灵敏度:可检测低至10 pg的RNA
  • 稳健保障:对于降解RNA和含抑制物的RNA仍可获得高cDNA得率
  • 更多消化:能够消化更多的残留DNA
  • 稳定可靠:产物可常温放置7天,试剂可反复冻融30次
应用案例
  • 反转录时间5分钟,总计7分5秒

第一链cDNA合成时间短,累计耗时约7分钟。比较了不同产品的cDNA合成程序,翌圣11155ES所需要的反应时间最短,并且在高温下进行反转录,避免了RNA复杂二级结构的影响。

  • cDNA得率更高,CT值降低

针对不同物种不同GC含量的靶标,表现出更高的cDNA合成效率。针对不同样本的RNA,使用不同反转录试剂按照各自说明书规定的程序进行cDNA合成,后续使用翌圣染料法qPCR试剂进行qPCR。数据表明,相比于其他反转录试剂,11155ES可获得更高的cDNA得率,CT值会更小。

  • 可检测低至10 pg的RNA

可检测低至10 pg的RNA。将293T细胞RNA(a)和拟南芥RNA(b)连续梯度稀释,使用11155ES进行cDNA合成。在RNA起始范围(从10 pg到1 μg)内,相关系数R2仍可达到0.99,效率高达96.4%(293T细胞)和100%(拟南芥)。

针对不同投入量的RNA,表现出更高的灵敏度。将293T细胞RNA和拟南芥RNA连续梯度稀释,使用不同反转录试剂按照各自说明书规定的程序进行cDNA合成,后续翌圣染料法qPCR试剂进行qPCR。△CT( CT (各反转录产品) – CT (11155ES))表明,相比于其他反转录试剂,11155ES在不同RNA投入下多表现更佳。

  • 对于降解RNA和含抑制物的RNA仍可获得高cDNA得率

针对降解的RNA,有出色的能力保障合成。使用不同程度降解的293T细胞RNA进行cDNA合成,使用不同反转录试剂按照各自说明书规定的程序进行cDNA合成,后续翌圣染料法qPCR试剂进行qPCR。Δ CT 值 (Δ CT = CT (各反转录产品) – CT (11155ES))表明,相比于其他反转录试剂,11155ES可获得更高的cDNA得率和更低的CT值。

针对含有抑制物的RNA,有出色的能力保障合成。在含有不同抑制剂的反应中,使用100 ng 293T细胞RNA进行cDNA合成。使用不同反转录试剂按照各自说明书规定的程序进行cDNA合成,后续使用翌圣染料法qPCR试剂进行qPCR。数据表明,在抑制剂存在的情况下,11155ES可获得更高的cDNA得率和更低的CT值。

  • 能够消化更多的残留DNA

能有效消化去除gDNA。以1000 ng人293T细胞DNA为模板,使用不同反转录试剂按照各自说明书规定的程序进行消化和反转录,同时设置不进行gDNA消化的实验组。后续使用翌圣11185ES进行qPCR。数据显示,试剂可对gDNA进行有效消化。

  • 产物可常温放置7天,试剂可反复冻融30次

合成产物于不同环境存储,仍能保持一定的稳定性。将11155ES合成得到cDNA产物分别在-80℃、-20℃、4℃、25℃和37℃放置1-7天。后续使用翌圣染料法qPCR试剂进行qPCR。数据显示,相较于-80℃,其他环境保存下得到的CT值相差不大,不超过0.5个CT

合成产物于不同环境存储,仍能保持一定的稳定性。将11155ES合成得到cDNA产物分别在-80℃、-20℃、4℃、25℃和37℃放置1-7天。后续使用翌圣染料法qPCR试剂进行qPCR。数据显示,相较于-80℃,其他环境保存下得到的CT值相差不大,不超过0.5个CT

存储条件

-25℃ ~ -15℃保存,有效期1年。逆转录产物可立即用于后续反应,也可4℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-20℃保存,避免反复冻融。

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