Strep(Ⅱ)标签蛋白纯化树脂：高效捕获、温和洗脱，重新定义蛋白纯化体验

2026-04-22

Strep标签（Strep-tag）技术是基于生物素-链霉亲和素（biotin-streptavidin）相互作用发展而来的一种蛋白质亲和纯化系统。

1993年，Schmidt和Skerra通过随机肽库筛选获得Strep标签(Trp-Arg-His-Pro-Gln-Phe-Gly-Gly)，能够特异性结合链霉亲和素的生物素结合口袋。与生物素相比，Strep标签和链霉亲和素间的亲和力较低，因此可以使用生物素衍生物(Diaminobiotin)，进行在生理条件下的温和洗脱。但Strep标签仅能接在目标蛋白的C端，对于需将标签接在N端或是蛋白内部的实验，非常的不实用。

经过进一步的优化后，得到了现在被广泛使用的Strep-tag Ⅱ标签 (Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys，WSHPQFEK)。链霉亲和素（Streptavidin）的突变体（二代）作为优化后的链霉亲和素，与Strep-tag Ⅱ标签的亲和力较链霉亲和素与Strep-tag Ⅱ提升了近100倍，这个改变使得洗脱时需改用脱硫生物素(Desthiobiotin) ，但过程一样温和。

链霉亲和素（Streptavidin）的突变体（三代）作为突变体（二代）的突变体，对Strep II标签的亲和力进一步提高，与生物素的亲和力大幅削弱。这个改变使其能够更牢固的结合Strep II融合蛋白，在融合蛋白表达丰度较低时，相对捕获量更高，载量和得率更高。在洗脱方面，可以使用生物素进行洗脱，比采用昂贵的脱硫生物素洗脱更经济，且使用后可采用 10~50 mM NaOH 进行再生。

Strep(Ⅱ)标签好在哪？

标签小:Strep-Tag II为8个氨基酸（WSHPQFEK）的小标签，不影响融合后蛋白质的结构和功能，因此无需去除该标签。

特异性高：Strep-tag II与Streptavidin突变体形成独特且高选择性的立体化学锁-钥匹配，几乎不与其他蛋白结合，特异性极高，能够在亲和层析中一步就获得超高纯度的蛋白。

载量高：从Streptavidin→二代突变体→三代突变体，对Strep-tag II 的亲和力提高近百倍，低丰度蛋白也能高效捕获。

双标签放大效应：Twin-Strep-tag Ⅱ是一个顺序排列的两个Strep-Tag II序列（通过内部氨基酸连接），利用总结合力显著增强结合强度，进一步提升低浓度样本纯化效率并可用于蛋白复合体捕获。

温和洗脱：Strep-tagⅡ系统可用脱硫生物素或生物素在生理条件下温和洗脱，保持蛋白活性。

蛋白两端均可融合：可用于6×His-Strep(Ⅱ)、Flag-Strep(Ⅱ)等组合式双标签。

经济再生：Streptavidin三代突变体允许用廉价生物素洗脱，并用10~50 mM NaOH再生，再生前后载量变化较小，可重复使用30次左右，成本大幅降低。

应用广泛：可用于各种表达系统，包括大肠杆菌、杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌等。

表1 链霉亲和素（Streptavidin）的突变体（二代）、链霉亲和素（Streptavidin）的突变体（三代）Agarose Resin 对比

填料名称	Strep(Ⅱ)Sep Agarose Purification Resin 4FF	Strep(Ⅱ)Sep Plus Agarose Purification Resin 4FF
基质	高度交联的4%琼脂糖微球	高度交联的4%琼脂糖微球
粒径	45-165 µm	45-165 µm
配体	链霉亲和素（Streptavidin）的突变体（二代）	链霉亲和素（Streptavidin）的突变体（三代）
载量/mL基质	3-5 mg Twin Strep-tag Ⅱ蛋白	8-10 mg Twin Strep-tag Ⅱ蛋白
产品应用	Strep-Tag Ⅱ、Twin Strep-Tag Ⅱ 标签蛋白纯化；	Strep-Tag Ⅱ、Twin Strep-Tag Ⅱ 标签蛋白纯化；
与生物素结合能力	与生物素结合较牢固，样品中少量D-生物素就会影响 Strep II 标签蛋白与链霉亲和素（Streptavidin）的突变体（二代）的结合效果。	与生物素的亲和力大幅削弱，样品中低浓度(50 μmol/L)的D-生物素不会影响 Strep II 标签蛋白与链霉亲和素（Streptavidin）的突变体（三代）的结合效果。
洗脱方面	1、使用脱硫生物素作为洗脱液，1 mM HABA或0.1 M NaOH再生前后载量变化较小，可再生10次左右。 2、使用D-生物素作为洗脱液，无法用HABA完全竞争取代，高浓度氢氧化钠（1 M）清洗后载量只能达到初始载量的50%左右，对填料损害较大。	可以使用D-生物素进行洗脱，且使用后可采用 10~50 mM NaOH 进行再生，再生前后载量变化较小，可重复使用30次左右。

实验数据

图1 Strep(Ⅱ)Sep Agarose Purification Resin 4FF纯化strep tag Ⅱ跑胶图

1:Marker；2:样品；3:流出液；4:洗脱液

纯度>98%

图2 Strep(Ⅱ)Sep Plus Agarose Purification Resin 4FF纯化strep tag Ⅱ跑胶图

1:Marker；2:样品；3:流出液；4:洗脱液

纯度>98%

图3 Strep(Ⅱ)Sep Agarose Purification Resin 4FF

脱硫生物素洗脱，再生次数跑胶图

M:Marker；1:样品；

2-4:第1次流穿、淋洗、洗脱；5-7:第2次流穿、淋洗、洗脱；

8-10:第3次流穿、淋洗、洗脱；11-12:第7次流穿、洗脱

图4 Strep(Ⅱ)Sep Plus Agarose Purification Resin 4FF

D-生物素洗脱，再生次数跑胶图

M:Marker；

1-9:第1、3、4、8、9、10、11、12、13次洗脱

提供Strep(Ⅱ)标签融合蛋白完整解决方案

Strep(Ⅱ)Sep Plus MagAgarose Beads（Cat#20783ES）

一种聚合物磁性微球，由高质量的链霉亲和素（Streptavidin）的突变体（三代）与平均粒径约为70 μm的琼脂糖磁珠通过共价偶联制备，可通过磁性分离快速便捷地进行蛋白纯化，更容易实现高通量、自动化的蛋白纯化方法。

Strep(Ⅱ)Sep Plus、Strep(Ⅱ)Sep 4FF Chromatography Column, 1 mL / 5 mL（Cat#20794ES/20796ES、20494ES/20496ES）

1 mL、5 mL预装柱，具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA等，方便客户操作。

Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel (Secretory or Membrane Protein)（Cat#20585ES）

由高质量的鼠源IgG2b单克隆抗体（克隆号：3F5）与4%高度交联的琼脂糖凝胶通过共价偶联制备，可用于带有Flag标签的融合蛋白（分泌蛋白或膜蛋白）纯化和免疫沉淀（IP）。

HisSep Ni-NTA Agarose Resin（Cat#20502ES）

以交联的6%琼脂糖凝胶为基质，通过化学方法偶联四配位的氮川三乙酸（NTA）为配体，螯合镍离子（Ni²⁺）后，形成非常稳定的八面体结构，镍离子处于八面体的中心，这样的结构可保护镍离子免受小分子的进攻，更加稳定，可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件。已经成为实验室纯化His标签蛋白不可或缺的树脂之一。

产品信息

产品定位

产品名称

产品编号

规格

链霉亲和素（Streptavidin）的突变体（三代）

Strep(Ⅱ)Sep Plus Agarose Purification Resin 4FF

Strep(Ⅱ)标签蛋白琼脂糖纯化树脂（耐生物素版）

20795ES03/08/25/60

1 mL/5 mL/

25 mL/100 mL

Strep(Ⅱ)Sep Plus 4FF Chromatography Column, 1 mL