Strep-Tag II为8个氨基酸的小标签（WSHPQFEK），由于标签小，仅为1.06 kDa左右，不影响融合后蛋白质的结构和功能，因此无需去除该标签。其特异性高，单步纯化纯度高，纯化条件温和，蛋白两端均可融合等突出特点迅速得到了广泛应用。Twin Strep-tag II是一个顺序排列的两个Strep-tag II序列（通过内部氨基酸连接），该标签能够像Strep-tag II一样进行温和、快速的纯化。

Streptactin 是最稳定的蛋白之一，其偶联至高度交联的4%琼脂糖微球上，可用于各种表达系统，包括杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌中含有Strep-Tag II标签蛋白纯化，同时该树脂也可用于 Twin Strep-Tag II 标签纯化。

Streptactin 4FF Chromatography Column是一种以Streptactin Agarose Resin 4FF为填料的中压预装柱，规格5 mL，该预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA等，方便客户操作。

 

产品性质

基质	高度交联的4%琼脂糖凝胶
配体	Streptactin
粒径	45-165 µm
载量	3-5 mg Twin Strep-Tag II 蛋白/mL 基质
最大流速	300 cm/h
储存缓冲液	含20%乙醇的1×PBS

 

储存条件

2~8℃保存，有效期2年。

 

使用说明

1 缓冲液的准备

所用水和缓冲液在使用之前建议用 0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤。

平衡/洗杂液: 100 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH 8.0或PBS：50 mM sodium phosphate,280 mM NaCl, 6 mM potassium chloride, pH7.4。

洗脱液: 在平衡/洗杂液中添加2.5 mM的脱硫生物素或D-生物素混匀即可。

再生液：平衡液中加入1 mM HABA（洗脱剂为脱硫生物素）或1 M NaOH（洗脱剂为D-生物素）。 

2  样品准备

样品在上样前建议用 0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤，防止堵塞柱子。

3 样品纯化（以Akta为例）

1）准备：将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。

2）清洗：3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。 

3）平衡：用5倍柱体积的平衡Buffer平衡层析柱，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。

4）上样：利用泵或样品环上样。

注意:样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的

样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。 

5）洗杂：用平衡/洗杂液冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少 10~15 个柱体积）。 

6）洗脱：使用 5~10 倍柱体积的洗脱液洗脱，收集洗脱液，即目的蛋白组分。

7）清洗与保存：依次使用3倍柱体积的平衡Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%乙醇中，置于4℃保存，防止填料被细菌污染。

4 SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。

5 填料再生和清洗

5.1 再生

5.1.1 洗脱剂为脱硫生物素

1）5倍柱体积的去离子水清洗柱子；

2）15倍柱体积的含1 mM HABA的平衡液再生；

3）30 倍柱体积平衡液清洗；

注：脱硫生物素被黄色溶液HABA取代，HABA一旦与Streptactin复合即变为红色。HABA随后被平衡液除去，柱子可被重复使用10次左右。

5.1.2 洗脱剂为D-生物素

1）5倍柱体积的去离子水清洗柱子；

2）15倍柱体积的1 M NaOH再生；

3）30 倍柱体积平衡液清洗；

注：D-生物素与Streptactin结合紧密，高浓度氢氧化钠清洗后载量只能达到初始载量的50%左右。

5.2 保存

填料再生清洗后保存在等体积的保护液中，2~8℃保存。

 

注意事项

1. 本产品仅作科研用途。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20231026