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400-6111-883
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Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR SYBR Green Kit
产品货号:11143ES50
产品规格:50T
产品价格:¥ 1126.00
类别:一步法反转定量

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  • 产品信息

    产品名称  

    产品编号

    规格

    价格(元)

    促销价(元)

    Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR SYBR Green Kit

    11143ES50

    50 T

    1126.00

    655.00

    Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR SYBR   Green Kit

    11143ES70

    200 T

    4126.00

    3300.00


    产品描述

    Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR SYBR Green Kit是以RNA为模板进行定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中,逆转录和定量PCR在同一反应管中进行,简化了实验操作,降低了污染的风险。本试剂盒以RNA为模板,使用基因特异性引物,利用耐热Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA,并以此为模板在UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase,配合优化的缓冲体系能够特异灵敏的对RNA模板进行精确定量。同时Buffer中额外添加了有效抑制非特异性PCR扩增的组分和提高扩增能力的促进因子,使定量PCR结果可以在宽广范围内更加真实有效。

    本试剂盒以Kit形式提供,2×Hifair® Ⅲ SG buffer包含优化的缓冲体系和dNTPs等,优化了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升PCR反应扩增效率的因子,适用于SYBR Green标记的高特异性检测系统。此外,Hifair® UH Ⅲ Enzymes包含比例优化的Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase、RNase inhibitor及UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase等。


    产品组分

    组分编号

    组分名称

    产品编号/规格

    11143ES50(50 T)

    11143ES70(200 T)

    11143-A

    2×Hifair®  SG buffer

    1.25 mL

    4×1.25 mL

    11143-B

    Hifair® UH  Enzymes

    50 μL

    200 μL

    11143-C

    Hieff® 50×High Rox

    50 μL

    200 μL

    11143-D

    Hieff® 50×Low Rox

    50 μL

    200 μL

    11143-E

    RNase-free ddH2O

    1.25 mL

    4×1.25 mL

    【注】SG buffer为SYBR Green buffer的简写,UH为UNICON-Hifair的简写。

    适用机型

    High Rox适用机型: ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus

    Low Rox 适用机型: ABI 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6,7,12k Flex

     Stratagene MX3000P, MX3005P, MX4000P

    不需要Rox校正的仪器型号:

    Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

    Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

    Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

    Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler2.0,Lightcycler 96;

    Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR


    运输与保存方式

    冰袋运输。-20℃避光储存,有效期一年。本品避免反复冻融。建议分装保存。


    注意事项

    1. 实验过程中请使用RNase-free耗材。

    2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
    3. 本产品仅作科研用途!

    反应体系(以20 μL为例)

    组分

    体积(μL)

    终浓度

    2×Hifair® Ⅲ SG   buffer

    10

    Hifair® UH Ⅲ Enzymes

    1


    Hieff® 50×High Rox or Low Rox

    0.4

    Forward Primer (10 μM)

    0.4

    0.2 μM

    Reverse Primer (10 μM)

    0.4

    0.2 μM

    模板 RNA

    Total RNA 1 pg-1 μg


    RNase-free ddH2O

    to 20


    【注】使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。

    a) 引物浓度:通常引物终浓度为0.2 μM,也可以根据情况在0.1-1.0 μM之间进行调整。

    b) 参比染料:Rox的添加,可根据不同仪器型号进行选择,具体可参考【适用机型】。

    c) 模板稀释:qPCR灵敏度极高,建议将模板进行稀释使用,控制CT值在20-30之间适宜。

    d) 反应体系:推荐使用20 μL或50 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

    e) 体系配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

    标准扩增程序


    反应阶段

    温度

    时间

    循环数

    1

    逆转录

    42℃

    10 min

    1

    2

    预变性

    95℃

    5 min

    1

    3

    扩增反应

    95℃

    10 sec

    40

    60℃

     30sec★

    4

    熔解曲线

    仪器默认设置

    1

    【注】 a) 逆转录:对于一些极低丰度的基因可以将逆转录时间适当延长至15min。

     b) 温度:对于含复杂二级结构或高GC含量的RNA模板,可将逆转录温度提高到55℃,有助于提升灵敏度。

     c) 荧光信号采集:不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同,请根据最短时间限制进行设置。

     d) 熔解曲线:通常情况下可以使用仪器默认程序。 


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