Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR SYBR Green Kit

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产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR SYBR Green Kit是以RNA为模板进行定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中,逆转录和定量PCR在同一反应管中进行,简化了实验操作,降低了污染的风险。本试剂盒以RNA为模板,使用基因特异性引物,利用耐热Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA,并以此为模板在UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase作用下,配合优化的缓冲体系能够特异灵敏的对RNA模板进行精确定量。同时Buffer中额外添加了有效抑制非特异性PCR扩增的组分和提高扩增能力的促进因子,使定量PCR结果可以在宽广范围内更加真实有效。

本试剂盒以Kit形式提供,2×Hifair® Ⅲ SG buffer包含优化的缓冲体系和dNTPs等,优化了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升PCR反应扩增效率的因子,适用于SYBR Green标记的高特异性检测系统。此外,Hifair® UH Ⅲ Enzymes包含比例优化的Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase、RNase inhibitor及UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase等。

 

产品信息

货号

11143ES50 / 11143ES70 / 11143ES80

规格

50 T / 200 T / 500 T

 

组分信息

组分编号

组分名称

11143ES50

11143ES70

11143ES80

11143-A

2×Hifair® Ⅲ SG buffer*

500 μL

4×500 μL

5 mL

11143-B

Hifair® UH Ⅲ Enzymes

50 μL

200 μL

500 μL

11143-C

Hieff® 50×High Rox

50 μL

200 μL

500 μL

11143-D

Hieff® 50×Low Rox

50 μL

200 μL

500 μL

11143-E

RNase-free ddH2O

500 μL

4×500 μL

5 mL

*SG buffer为SYBR Green buffer的简写,UH为UNICON-Hifair的简写。

 

储存条件

-25~-15℃避光储存,有效期1年。本品避免反复冻融。建议分装保存。

 

使用说明

组分

体积 μL

终浓度

2×Hifair® Ⅲ SG buffer

10

Hifair® UH Ⅲ Enzymes

1

-

Hieff® 50×High Rox or Low Roxb

0.4

Forward Primer (10 μmol/L)

0.4

0.2 μmol/La

Reverse Primer (10 μmol/L)

0.4

0.2 μmol/La

模板 RNAc

Total RNA 1 pg-1 μg

-

RNase-free ddH2O

to 20d

-

1反应体系(以20 μL为例)**

**使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。

a. 引物浓度:通常引物终浓度为0.2 μmol/L,也可以根据情况在0.1-1.0 μmol/L之间进行调整。

b. 参比染料:Rox的添加,可根据不同仪器型号进行选择,具体可参考【适用机型】。

c. 模板稀释:qPCR灵敏度极高,建议将模板进行稀释使用,控制CT值在20-30之间适宜。

d. 反应体系:推荐使用20 μL或50 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e. 体系配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染

 

循环步骤

温度

时间

循环数

逆转录

42℃b

10 mina

1

预变性

95℃

5 min

1

扩增反应

95℃

10 sec

40

60℃

30 sec

熔解曲线d

仪器默认设置

1

2 标准扩增程序***

***针对实验需求可做适当调整。

a. 逆转录:对于一些极低丰度的基因可以将逆转录时间适当延长至15 min。

b. 温度:对于含复杂二级结构或高GC含量的RNA模板,可将逆转录温度提高到55℃,有助于提升灵敏度。

c. 荧光信号采集:不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同,请根据最短时间限制进行设置。

d. 熔解曲线:通常情况下可以使用仪器默认程序。

 

适用机型

High Rox适用机型: ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus;

Low Rox适用机型: ABI 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6, 7, 12k Flex;

     Stratagene MX3000P, MX3005P, MX4000P;

不需要Rox校正的仪器型号:

Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler2.0, Lightcycler 96;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.

 

注意事项

  1. 实验过程中请使用RNase-free耗材。
  2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
  3. 本产品仅作科研用途!

 

Ver.CN20230404

400-6111-883