MolPure® Mag32 Residual DNA Sample Preparation Kit FA适用于生物制品样本中残留DNA检测的前处理。采用独特的磁珠和精心优化的缓冲体系，可最大限度的分离纯化样本中的微量宿主DNA。配合磁珠法自动化提取仪器和移液法自动化仪器使用，可实现核酸的高通量提取。

该前处理试剂盒可与本公司的多种宿主细胞DNA残留（qPCR法）检测试剂盒配合使用，包括CHO宿主细胞残留DNA检测试剂盒（Cat#41301ES）、HEK293宿主细胞残留DNA检测试剂盒（Cat#41302ES）、Vero宿主细胞残留DNA检测试剂盒（Cat#41303ES）和E.coli残留DNA检测试剂盒（Cat#41304ES）。

 

产品组分

类别	组分编号	组分名称	产品编号/规格
			18462ES32 （2×16 T）	18462ES5 （6 ×16 T）
Part I	18462-A	蛋白酶K（20 mg/mL）	700 μL/支×1	1 mL/支×2
Part Ⅱ	18462-B	96孔预装板	1块×2	1块×6
	18462-C	8联磁棒套	2条/包×2	2条/包×6
	18462-D	裂解液	4 mL	12 mL
Part Ⅲ	18462-E	糖原	300 μL	900 μL
	18462-F	Poly A钾盐	200 μL	600 μL

【注】：适用机型为杭州奥盛Auto-Pure32A自动化核酸提取仪及同类型仪器（加热槽位为1、6、7、12）。

 

运输和保存方法

1. Part I组分冰袋运输，4℃可保存1年，长期保存于-20℃。

2. Part II组分室温运输，室温保存，有效期1年。

3. Part Ⅲ组分干冰运输，-20℃保存1年。

4. 收到货后，请检查Part I、Part II和Part Ⅲ共3个组分是否齐全，并立即放入对应的保存温度中储存。

 

注意事项

1. 使用前请详细阅读使用说明书，严格按照使用说明书操作，样本处理建议在超净台或生物安全柜中进行。

2. 配合全自动核酸提取仪使用前，需对全自动核酸提取仪进行紫外消毒。使用完毕后，用75%酒精擦拭提取仪内部并进行紫外消毒30 min。

3. 注意观察常温保存溶液是否有析出或浑浊（尤其冬季室温为低温环境时），可37℃水浴至溶液澄清，避免影响使用效果。

4. 洗脱时可能存在磁珠残留，吸取样本时应尽量避免吸入磁珠。

5. 处理样本及加样时，勤换枪头，避免交叉污染。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

7. 本产品仅作科研用途。

 

实验前准备

1. 自备设备：漩涡振荡器、水浴锅或金属浴、杭州奥盛Auto-Pure32A自动化核酸提取仪或其他品牌全自动化核酸提取仪。

2. 自备耗材：10μL-1000μL不等的低吸附带滤芯枪头、1.5 mL低吸附离心管。

3. 自备试剂：1×PBS缓冲液（pH 7.4，无 Mg 和 Ca 离子）、超纯水。

【注】：推荐您购买本公司的超纯水（Cat#10116ES）。

 

使用方法

配套自动化仪器使用，以杭州奥盛Auto-Pure32A自动化核酸提取仪为例（如要配套其他主流品牌自动化仪器使用，程序可向翌圣生物科技（上海）股份有限公司获取）：

一、预封装试剂准备

1. 从试剂盒中取出预装板，颠倒混匀数次使磁珠重悬，轻甩孔板，使试剂及磁珠都集中到孔板底部。小心撕去预装板封膜，避免振动，防止液体溅出。

2. 根据处理样本数量，向预装板样品处理孔（第1、7列）加入9 μL糖原和6 μL Poly A钾盐。

二、 样本处理

1. 待测样本为疫苗等本身含有较高的DNA含量的样本，可用1×PBS（pH7.4，无Ca和Mg）对样本进行适当比例稀释后提取（对样本进行稀释是为了保证检测的准确性，使样本的检测值在标准曲线线性范围之内，通常可考虑进行100倍稀释）。

2. 待测样本为干粉的，可用超纯水将样本稀释成10 mg/mL或者100 mg/mL后使用。

3. 待测样本为复杂背景基质的，可根据需要进行加标回收实验，以确定合适的样本稀释倍数。

4. 取100 μL样本装于1.5 mL离心管中，加入100 μL裂解液和10 μL蛋白酶K，涡旋混匀10 sec。

【注】：样本蛋白浓度0-100 mg/mL，蛋白酶K用量为10 μL；样本蛋白浓度100-200 mg/mL，蛋白酶K用量为20 μL。

5. 60℃孵育20 min，即为预处理样本，待用。

三、自动化提取

1. 将预处理样本加入样品处理孔（第1、7列）。

2. 按照提取仪的位置，正确安放上述96孔预装板，并放置96深孔磁棒套。

3. 运行如下程序，程序结束后，将洗脱板转移至新的离心管中，溶液可置于-20℃短期保存，-80℃长期保存。

奥盛Auto-Pure32A的提取仪器的提取程序

步骤	孔位	混合时间(min)	吸磁时间(sec)	等待时间(min)	容积(μL)	混合速度(1-10)	温度(℃)	混合位置(0-100%)	混合幅度(1-100%)	吸磁位置(0-100%)	吸磁速度(1-10)
移磁珠	3	0.2	60	0	500	5	/	0	80	0	1
结合	1	15	90	0	600	5	/	0	80	0	1
清洗1	2	1	60	0	500	8	/	0	80	0	1
清洗2	3	1	60	4	500	8	/	0	80	0	1
洗脱	6	8	90	0	100	10	65	0	80	0	1
弃磁珠	3	0.2	0	0	500	5	/	0	80	0	1

 

HB220518