rProtein G MagBeads(IP Grade)蛋白G免疫磁珠

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产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

rProtein G免疫沉淀磁珠是粒径为 200nm 的纳米磁珠表面上共价偶联了大量的 Protein G 蛋白,纳米级磁珠提供的超大比表面积,具有更多的结合位点,磁珠使用量更少,非特异性吸附率低。重组 Protein G 蛋白更适合于结合mouse IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, rat IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG2c, rabbit and goat polyclonal Abs, 以及human IgG1, IgG2, IgG3 和 IgG4。本品适用的范围广泛,可应用于细胞裂解液、细胞分泌液上清、血清、动物腹水以及其它的免疫抗原等样本的免疫沉淀(IP)和免疫共沉淀(COIP)

 

产品性质

基质(Matrix spherical)

硅基磁珠

配体(Ligand)

重组Protein G

结合能力(Binding Capacity)

0.85 mg hIgG /mL磁珠

粒径 Particle size)

200 nm

磁珠浓度(Concentration)

10 mg/mL

应用(Application)

IP、COIP、CHIP、RIP等

 

运输和保存方法

冰袋运输。2-8℃长期储存,有效期2年。

 

注意事项

1.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2.本产品仅作科研用途!

 

使用方法

1. 缓冲液配制

平衡/结合/洗杂液:

0.15 M NaCl, 20 mM Na2HPO4, pH 7.0

中和缓冲液:

1 M Tris-HCl,pH 8.5

洗脱缓冲液:

0.1 M 甘氨酸,pH 3.0

终止液:

50 mM Tris, pH 7.5

注:上述缓冲液为推荐的缓冲液配制,但IP实验中不同类型的抗体与抗原结合的亲和性是有区别的,抗体与抗原结合还会受到IP Lysis/Wash Buffer 的影响,因此可自行优化操作细节或者筛选及配制缓冲液进行实验。

2. 抗原样品制备

本操作说明书提供以下四种样品处理方法,建议您根据不同来源的抗原样品选择适当的方式进行预处理,使待检测抗原释放至样品溶液中。

血清样品处理:若目标蛋白丰度较高, 建议用结合缓冲液稀释血清样品至目标蛋白终浓度为10-100 µg/mL,置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。

悬浮细胞样品处理:离心收集细胞(4℃, 500g, 10 min),弃上清后称重,按每毫克细胞50 µL的比例用1×PBS洗涤2次;按每毫克细胞5-10 µL的比例加入结合缓冲液,同时加入蛋白酶抑制剂,混匀后置于冰上处理10 min;离心收集上清液(4℃, 14000g, 10 min),置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。

贴壁细胞样品处理:移去培养基,按每 1.0×105个细胞150 µL的比例用1×PBS洗涤两次;用细胞刮棒刮脱细胞,收集至1.5 mL EP管内,按每 1.0×105个细胞20-30 µL的比例加入结合缓冲液,同时加入蛋白酶抑制剂,混匀后置于冰上处理10 min;离心收集上清液(4℃, 14000g, 10 min),置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。

大肠杆菌样品处理 离心收集大肠杆菌(4℃, 12000g, 2 min), 弃上清后称重, 按每克(湿重)菌体10 mL的比例用1×PBS洗涤2次;按每克(湿重)菌体5-10 mL的比例加入结合缓冲液,同时加入蛋白酶抑制剂,重悬菌体,超声裂解细胞,离心收集上清(4℃, 17000g, 10 min)。

3.免疫复合物的制备:

注意:样品所需的量和孵育时间均依赖于每个特定的抗体-抗原体系,因而可能需要优化才能得到最大产量。

以下实验方案针对 2~10 μg 亲和纯化的抗体,根据需 要可以按比例放大。

1)在离心管中,将每个样品的细胞裂解液与 2~10 μg 免疫沉淀抗体结合。每个免疫沉淀反应推荐的总蛋白量为500 ~1500 μg。

2)用IP Lysis/Wash Buffer将抗体以及制备好的样品稀释至 300~500 μL。

3)在室温下孵育 1~2 h,或 4℃ 2~4 h,以形成免疫复合物。

4. 磁珠预处理:将磁珠漩涡振荡1 min,使其充分混悬;取25-50 µL磁珠悬液置于1.5 mL EP管中。加入500 µL预冷结合缓冲液洗涤,进行磁性分离,吸弃上清,重复1次。加入200 µL结合缓冲液重悬磁珠备用。

5. 免疫沉淀 

1) 将抗原样品/抗体混合物加入装有磁珠的离心管中保持混匀室温下孵育1~2 h,或4℃ 2~4 h。

2) 上述磁珠-抗体-抗原复合物进行磁性分离,收集上清液,以备后续检测。

3) 向离心管中加入1 mL洗杂液,用移液器轻轻吹打使磁珠-抗体-抗原复合物均匀分散,然后进行磁性分离,弃上清液;从磁分离器上取下离心管,再重复洗涤两次。

6.抗原洗脱

A. 变性洗脱 此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。

1) 从磁分离器上取下离心管,向其中加入25 μL 1×SDS-PAGE Loading Buffer 混合均匀, 95℃加热5 min。

2) 置于磁性分离器上,进行磁性分离,收集上清液进行SDS-PAGE检测。

B. 非变性洗脱

1) 向磁珠-抗体-抗原复合物中加入50 μL洗脱液,混合均匀,室温孵育5 min。

2) 置于磁性分离器上,进行磁性分离,收集洗脱液至新的 EP 管中。

3) 重复步骤 1)和2),收集洗脱液,与2)中洗脱液混合,加入中和液中和至 pH7.0-8.0。

                                                                    HB230106

400-6111-883