精品│翌圣ZymeEditor打造超高文库转化率T4 DNA Ligase

建库作为NGS测序的核心步骤，直接影响测序质量，文库转化率是评估文库质量的重要指标，高的文库转化率一定程度上意味着文库丰富度、测序数据均一性更好。常规T4 DNA Ligase催化DNA的 3’-OH 和接头的5’-磷酸基团之间形成磷酸二酯键完成接头连接，但此过程中会出现片段自连，从而减低文库转化率，影响文库丰富度与测序质量。翌圣ZymeEditor™酶改造平台对T4 DNA Ligase进行定向改造获得Hieff® 5' App T4 DNA Ligase（Cat#14960ES），该突变体只能以预苷化接头为底物进行接头连接，显著减少片段自连，提高文库转化率。

图1. NGS常规建库流程

产品特点

1、极低片段自连：只能以预腺苷化的接头为底物，极大降低片段自连。

2、超高接头连接效率：连接效率达95%以上。

3、严格质控：无切口酶、外切酶及RNase残留。

数据展示

1、连接效率达95%以上

以100ng 170bp和300bp的模式片段为底物，使用Hieff® 5' App T4 DNA ligase对合成的预腺苷化（App）接头进行接头连接，结果显示连接效率达95%以上，且片段自连占比极低。

图2. 以170 bp模式片段为底物连接效率检测

图3. 以300 bp模式片段为底物连接效率检测

2、无RNase 残留

将2000 U Hieff® 5' App T4 DNA ligase与底物RNA孵育，琼脂糖凝胶电泳比较RNA谱带变化。结果显示翌圣Hieff® 5' App T4 DNA ligase无RNase残留。

图4. RNase残留检测 C：阴性对照

3、无切口酶及外切酶残留

将200 U Hieff® 5' App T4 DNA ligase与底物DNA孵育，琼脂糖凝胶电泳比较DNA谱带变化。结果显示翌圣Hieff® 5' App T4 DNA ligase无切口酶残留。

图5. 切口酶残留检测 C：阴性对照

将2000 U Hieff® 5' App T4 DNA ligase与底物DNA孵育，琼脂糖凝胶电泳比较DNA谱带变化。结果显示翌圣Hieff® 5' App T4 DNA ligase无外切酶残留。

图6. 外切酶残留检测 C：阴性对照

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常规接头连接	Hieff Quick T4 DNA Ligase	10301ES
预腺苷化接头连接	Hieff 5' App T4 DNA ligase	14960ES
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翌圣ZymeEditor™酶改造定制服务

翌圣ZymeEditor™是一个酶改造底层技术平台，它基于翌圣生物多年在分子酶改造领域中的技术积累与知识拓展，该平台已具备对多种酶的多种需求进行定向改造的能力。因此，ZymeEditor™平台从2023年开始正式推出酶改造对外定制服务，可为各种应用领域（如医药、诊断、食品、化工等）的客户提供全套酶改造服务，也可以单独提供蛋白发酵及纯化工艺开发优化、规模化生产服务，以满足不同客户的需求，助力产业升级。

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