产品描述
琼脂糖(Agarose)是纯化的线性半乳聚糖亲水胶体,提取自琼脂或者含琼脂的海藻,结构上是一种线性聚合物,由β-D-吡喃半乳糖(1-4)连接3,6-脱水α-L-吡喃半乳糖基构成。作为一种凝胶试剂,常用于通过凝胶电泳或者印迹法(如Northern或Southern)来进行日常核酸分析,也适用于蛋白应用,如辐射状免疫扩散(RID)实验。
本品为PCR级高分辨率琼脂糖,对PCR产物、小片段DNA具有较高的分辨率,适宜分离20 bp-800 bp的DNA片段,其分离效果可与聚丙烯酰胺相媲美。此外,还具有如下特点:1)易溶解,胶液更清澈,可以配制高达5%的凝胶;2)很低的背景;3)品质稳定等。
琼脂糖的基本参数,包括:
1.)硫酸盐含量(sulfate content)——纯度指标,因为硫酸根是存在琼脂糖内的主要离子基团;
2.)凝胶强度(gel strength)——施加于凝胶使之断裂的外力;
3.)胶凝点(Gel point)——水溶性琼脂糖溶液冷却后形成凝胶时的温度。液体向凝胶转化的过程中,琼脂糖溶液具有滞后性,因此,胶凝点不等同于胶熔点。
4.)电渗(EEO)——液体穿透凝胶的一种电动运动。琼脂糖凝胶内的阴离子基团吸附在基质上不会发生迁移,但是解离的阳离子就会朝负极迁移,从而产生电渗。由于生物聚合物的电泳迁移通常是朝负极运动,则EEO产生的内部对流会干扰分离效率。
产品性质
CAS号(CAS NO.) |
39346-81-1 |
外观(Appearance) |
白色粉末 |
凝胶强度(Gel Strength) |
≥750g/cm2(1.5% gel) |
凝胶温度(Gel Point) |
≤33℃(1.5% gel) |
融胶温度(Melting Point) |
≤70℃(1.5% gel) |
电渗值(EEO, -mr) |
≤0.10 |
外观(Appearance) |
无色清澈胶液 |
硫酸盐(Sulfate, %) |
≤0.10% |
水分(Moisture) |
≤10% |
灰分(Ash Content) |
≤0.5% |
DNA酶(DNase) |
Not detected |
RNA酶(RNase) |
Not detected |
蛋白酶(Protease) |
Not detected |
核酸内切酶(Endonuclease) |
Not detected |
运输和保存方法
室温运输。室温干燥保存。有效期5年。
使用方法
1)配制适量电泳及制胶用的缓冲液(根据电泳需要,配制合适浓度的电泳及制胶缓冲液),倒入合适三角瓶中。
【注】:用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须是相同的。
2)根据制胶量及凝胶浓度,加入准确称量的琼脂糖粉(总液体量不宜超过三角锥瓶的50%容量)。
3)在微波炉中加热溶解琼脂糖,设置中火加热至沸腾,保持胶液沸腾约30 Sec,戴上防热手套,移开三角锥瓶,小心摇动三角锥瓶,重悬未溶解颗粒,再次用高火加热1 min(或加热直至琼脂糖完全溶解)。请戴上防热手套,小心摇动三角锥瓶,使琼脂糖胶液充分均匀。
【注】:必须保证琼脂糖充分完全溶解,此时琼脂糖胶液清澈,否则,会造成电泳图像模糊不清。加热时如胶液剧烈沸腾发泡,停止加热。微波炉中加热时间不宜过长。
4)使溶液冷却至60℃左右,如需要可在此时加入溴化乙锭(EB)溶液使其终浓度为0.5 µg/ml,并充分混匀。
【注】:溴化乙锭是一种致癌物质。使用含有溴化乙锭的溶液时,请戴用手套。建议使用我司提供的EB无毒替代品(YeaRed 核酸染料,Cat# 10202),使用时仅需用制胶缓冲液稀释至1×工作液即可。
5)将琼脂糖溶液倒入制胶模具中,在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在3-5 mm之间。
6)在室温下使胶凝固(大约30 min-1 h),然后放置于电泳槽中进行电泳。
【注】:凝胶不立即使用时,请用保鲜膜将凝胶包好后在4℃下保存,一般可保存 2~5 天。
琼脂糖浓度与DNA分离范围
线性DNA片段大小(bp) |
20-250 bp |
50-500 bp |
100-1200 bp |
500-2000 bp |
琼脂糖浓度(%) |
5.0 |
4.0 |
3.0 |
2.0 |
注意事项
1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2)本产品仅作科研用途!
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产品名称 |
货号 |
规格 |
10201ES03 |
1 mL |
|
10202ES76 |
500 μL |
|
10204ES76 |
500 μL |
|
10208ES60/76 |
100/500 g |
|
10214ES08/25 |
5/25 g |
|
10501ES60/80 |
100/1000 T |
HB210824