在肿瘤精准医疗领域，有一个概念正在重新定义“治愈”的标准——微小残留病（Minimal Residual Disease, MRD）检测。它能够在影像学尚无表现时，提前数月预警肿瘤复发；它能够在治疗过程中实时监测疗效，指导个体化用药。

然而，这项被誉为“液体活检皇冠上的明珠”的技术，却有一个至关重要的前提——高质量的血浆游离DNA（circulating cell-free DNA, cfDNA）提取。面对血浆中低至纳克级别的cfDNA，如何高效、稳定地捕获这稍纵即逝的“生命密码”，成为MRD检测的第一道关卡。

一、MRD：肿瘤复发预警的“哨兵”

微小残留病灶（Minimal Residual Disease, MRD），是指在经过根治性手术或系统性治疗后，体内仍残留的微量癌细胞或癌细胞DNA，常规影像学或形态学检查无法发现，却是导致肿瘤复发的“种子”。研究表明，MRD阳性患者的复发风险显著高于MRD阴性患者。

近年来，基于ctDNA（循环肿瘤DNA，cfDNA中来自肿瘤细胞的部分）的MRD检测技术迅速发展。在B细胞急性淋巴细胞白血病（B-ALL）研究中，接受CAR-T治疗的患者中，87.5%在治疗后28天通过流式细胞术检测达到完全缓解，但其中71.4%最终复发。而ctDNA MRD检测在85.7%的复发患者中提前捕捉到阳性信号。在实体瘤领域，ctDNA-MRD同样展现出巨大潜力。在结直肠癌、肺癌、乳腺癌等癌种中，术后ctDNA检测阳性患者的复发风险显著升高，ctDNA可比影像学提前数月提示复发。这些研究共同指向一个结论：ctDNA-MRD是预测复发、指导治疗的强大工具。

图1 肿瘤患者的全流程管理（Nat Rev Cancer. 2017 Apr;17(4):223-238. ）

二、 cfDNA：一个“难伺候”的分析物

MRD检测的物质基础是循环游离DNA（cfDNA），特别是其中来源于肿瘤的循环肿瘤DNA（ctDNA）。

1. 什么是cfDNA/ctDNA？

正常生理情况下，cfDNA主要来源于衰老凋亡细胞基因组DNA的降解，当机体发生疾病时，如恶性肿瘤、外伤、器官移植排异、组织器官衰竭和感染重大疾病等，异常坏死细胞会释放大量DNA进入血液循环。在肿瘤患者体内，由肿瘤细胞释放的那部分cfDNA被称为ctDNA，它携带了肿瘤特有的基因突变信息，是MRD检测的“金矿”。

图2 Cell-free DNA来源（图片来源：网，侵删）

2. 提取难度：真正的“大海捞针”

从血液中提取ctDNA进行MRD检测，面临着极高的技术挑战。

（1）含量极低（丰度低）：在术后或治疗后的MRD场景下，患者血液中的ctDNA含量极低，可能仅占总cfDNA的0.01%甚至更低。这意味着在每毫升血浆中，目标突变分子可能只有几个到几十个拷贝。任何提取过程中的损失，都可能导致假阴性。

（2）片段短小（片段化）：cfDNA主要以核小体为单位断裂，长度集中在160-180bp。传统的基因组DNA提取方法往往倾向于保留长片段，而容易丢失这些珍贵的短片段，或者在操作中造成进一步断裂。

图3 Cell-free DNA片段分布（图片来源：网，侵删）

（3）背景噪音大（干扰多）：血液中绝大部分cfDNA来自正常白细胞，其浓度可能是ctDNA的成千上万倍。此外，血浆中还含有大量的血红蛋白、免疫球蛋白、脂质以及抗凝剂，这些都是下游PCR扩增和测序反应的强抑制剂。

（4）外源污染风险：如果在采血或处理过程中操作不当导致白细胞破裂，释放出大量高分子量的基因组DNA，会瞬间稀释ctDNA的比例，彻底淹没真实的突变信号，导致检测失败。

三、磁珠法cfDNA提取的核心优势

传统的cfDNA提取多采用离心柱法，依靠硅胶膜在离液盐条件下选择性吸附DNA。这类方法产量高，但操作繁琐、耗时长，难以实现高通量和自动化。

磁珠法的出现改变了这一局面。其核心原理是利用表面修饰的磁性颗粒，在特定缓冲液条件下选择性结合核酸，通过磁力架分离纯化，再以低盐缓冲液洗脱。磁珠法更适合自动化，无需离心，全程可在自动化工作站完成。翌圣生物推出的MolPure® Magnetic Circulating Cell-Free DNA Kit（货号18382ES/18383ES）采用独特的磁珠和精心优化的缓冲体系，专门针对血浆/血清样本中的微量cfDNA设计。其核心技术特点包括：

1. 高效捕获：磁珠表面经特殊修饰，对小片段DNA具有高亲和力，完美匹配cfDNA的片段范围。
2. 强力去杂：优化的裂解结合缓冲液，有效去除蛋白、脂质等PCR抑制物，提取产物纯净、无扩增抑制物残留。
3. 优异稳定性：以1 mL人血浆为样本，翌圣提取试剂盒的提取总量较高，组内稳定性较好。
4. 建库性能卓越：取2 ng cfDNA进行文库构建，翌圣试剂盒的文库产量及片段大小理想，满足高灵敏度检测需求。
5. 对于高通量检测实验室，翌圣提供预封装磁珠法试剂盒（货号18383ES，24T），适配自动化提取仪。仅需将血浆样本放入仪器，选择程序，即可完成24个样本的提取。

四、实操建议

为了在MRD研究中获得最可靠的数据，除了选择好的试剂盒，还需注意：

1. 采血管选择：务必使用专用的cfDNA保存管，严禁使用普通EDTA管长时间存放，以防白细胞裂解。
2. 血浆分离：采血后尽快（2-4小时内）完成两次离心，动作轻柔，切勿吸到中间层白细胞。
3. 防污染：全程使用带滤芯吸头，设立阴性对照，监控环境背景。
4. 避免反复冻融：血浆样本应分装保存于-80℃。

五、总结

肿瘤MRD检测正在改变癌症患者的全程管理，从术后复发预警到疗效动态监测，从治疗决策指导到耐药机制探索，而这一切的前提，是获得高质量、高纯度的cfDNA。cfDNA的特殊性决定了其提取绝非易事，低丰度、小片段、易降解、易污染，每一步都充满挑战。翌圣生物MolPure® Magnetic Circulating Cell-Free DNA Kit，凭借独特的磁珠技术、优化的缓冲体系、严格的质控标准，为MRD检测提供了稳定可靠的“第一关”保障。

翌圣生物cfDNA提取试剂选择指南

产品名称	货号	规格
MolPure® Magnetic Circulating Cell-Free DNA Kit 血浆、血清游离DNA提取试剂盒	18382ES	20 T/50 T/200 T
MolPure® Magnetic Circulating Cell-Free DNA Kit （KF Prepackaged）血浆、血清游离DNA提取试剂盒（KF预装版）	18383ES	24 T