产品简介

 

MolPure® Magnetic Circulating Cell-Free DNA Kit  适用于从0.3-4 mL的血浆、血清样本中的提取游离DNA。本产品采用独特的磁珠和精心优化的缓冲体系，可最大限度的纯化回收游离DNA（每毫升血浆通常为1-100 ng）。提取的核酸产量高，质量稳定可靠，最大限度的去除抑制物，适用于各种下游应用实验，如建库、二代测序、qPCR等。

 

组分信息

 

类别	编号	组分名称	18382ES20	18382ES50	18382ES70
Part I	18382-A	蛋白酶K溶液（20 mg/mL）	1 mL/支×1	1.25 mL/支×2	10 mL/瓶×1
	18382-B	磁珠悬浮液	600 μL/支×1	750 μL/支×2	6 mL/瓶×1
Part II	18382-C	裂解液	1 mL/支×1	2.5 mL/瓶×1	10 mL/瓶×1
	18382-D	结合液	25 mL/瓶×1	65 mL/瓶×1	125 mL/瓶×2
	18382-E	洗涤液A	32 mL/瓶×1	80 mL/瓶×1	320 mL/瓶×1
	18382-F	洗涤液B	45 mL/瓶×1	110 mL/瓶×1	440 mL/瓶×1
	18382-G	洗脱液	2 mL/瓶×1	5 mL/瓶×1	15 mL/瓶×1

 

储存条件

 

Part I组分2~8℃保存，有效期18个月。

Part II组分室温保存，有效期18个月。

 

实验前准备

 

自备设备和试剂：磁性分离架（适用于1.5 mL和15 mL离心管），水浴锅或金属浴，涡旋振荡器，旋转混匀仪，1.5 mL和15 mL离心管等。

 

使用说明

 

不同体积样本所用试剂体积如下表    

试剂	血浆/血清体积
	300 μL	1 mL	2 mL	4 mL
蛋白酶K	15 μL	50 μL	100 μL	200 μL
血浆样本	300 μL	1 mL	2 mL	4 mL
样本裂解液	15 μL	50 μL	100 μL	200 μL
结合液	375 μL	1.25 mL	2.5 mL	5 mL
磁珠悬浮液	9 μL	30 μL	60 μL	120 μL
洗脱体积	10～20ul	30 μL	50 μL	50～80μL

A:手动法提取操作步骤

以2 mL样本操作为例：

1. 根据上表，向15 mL离心管中加入2 mL血浆样本和100 μL蛋白酶K，颠倒混匀后加入100 μL裂解液，短暂涡旋混匀后，60 ℃孵育20 min，期间需上下颠倒混匀2-3次。
2. 冷却至室温(5～10 min)，向离心管中加入2.5 mL结合液和60 μL磁珠（充分涡旋震荡混匀），短暂涡旋混匀，室温中速旋转孵育10 min。
3. 将上述离心管转移至磁力架中，静置约5 min观察到磁珠完全吸附在管壁上，小心吸除上清液。
4. 向上述离心管中加入800 μL洗涤液A，涡旋振荡20 s使磁珠彻底分散，将磁珠和洗涤液A全部转移至洁净的1.5 mL离心管中，并保留该15 mL离心管以供步骤5润洗。
5. 将1.5 mL离心管放入磁力架中，静置约1 min，待溶液澄清后，吸取上清液转移至步骤4保留15 mL离心管中进行润洗，并将其全部转移至包含磁珠的1.5 mL离心管中，待溶液澄清后小心吸弃上清液。
6. 向1.5 mL离心管中加入800 μL洗涤液A，涡旋振荡20 s，瞬时离心后将离心管转移至磁力架，待溶液澄清后小心吸弃上清液。
7. 向离心管中加入1 mL洗涤液B，涡旋振荡1 min。
8. 瞬时离心后将离心管转移至磁力架，待溶液澄清后小心吸弃上清液。
9. 重复步骤7-8。
10. 短暂离心后将离心管放置在磁力架上，小心吸除残余液体。
11. 开盖室温放置2～5 min使乙醇充分挥发，观察到磁珠表面无液体或刚出现龟裂即可。（注：磁珠不能过度干燥，过度干燥会导致洗脱效率下降。若室温过低可适当延长晾干时间。）
12. 向晾干后的离心管中加入洗脱液，涡旋振荡5 min，短暂离心后将离心管置于磁力架上直至磁珠彻底吸附，收集洗脱液（注意不要吸到磁珠）。
13. 核酸溶液短期保存于-20 ℃，长期保存需放置于-80 ℃。

 

注意事项

 

1. 注意观察各溶液是否有析出或浑浊（尤其是裂解液，结合液组分），如有浑浊可40 ℃加热处理使溶液澄清。

2. 磁珠应4℃冷藏保存，避免冻存或反复冻融，以免影响使用效果。

3. 洗脱时可能存在磁珠残留，吸取核酸时应尽量避免吸入磁珠。

4. 样本保存时间过长、血浆含有基因组核酸或者样本在室温放置过久均会导致目标核酸得率降低。为了保证提取得率，样本可以是新鲜、冷冻状态下未经冻融或者在cf DNA保存管中有效保存的血浆和血清。血浆的分离与储存建议见附录1。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

6. 本产品仅作科研用途。

 

Ver. CN20240921