产品简介

 

MolPure® Magnetic Bacterial DNA Kit 为革兰氏阴性、革兰氏阳性细菌和真菌DNA的提取提供了一个简单快速的解决方案，该方法采用超顺磁性的磁性粒子纯化技术，提取过程中无需使用有毒的酚氯仿抽提，操作简单方便，纯化的DNA可直接用于酶切、PCR、测序和标记等相关实验。

 

组分信息

 

类别	组分编号	组分名称	18565ES24	18565ES48
PartⅠ	18565-A	RNase A	3 mg×1支	6 mg×1支
	18565-B	蛋白酶K	0.6 mL×1支	1.1 mL×1支
PartⅡ	18565-C	酶溶解液	0.5 mL×1支	1 mL×1支
	18565-D	裂解液	13 mL×1瓶	25 mL×1瓶
	18565-E	裂解结合液	17 mL×1瓶	33 mL×1瓶
	18565-F	磁珠悬浮液	0.6 mL×1瓶	1.1 mL×1瓶
	18565-G	洗涤液A	20 mL×1瓶	40 mL×1瓶
	18565-H	洗涤液B	20 mL×1瓶	40 mL×1瓶
	18565-I	洗涤液C	20 mL×1瓶	40 mL×1瓶
	18565-J	洗脱液	3 mL×1瓶	6 mL×1瓶
	18565-K	研磨管	0.9 g×24支	0.9 g×48支

 

储存条件

 

1.PartⅠ室温运输，2~8℃保存，有效期18个月；

2.PartⅡ室温运输，室温避光保存，有效期18个月。

 

注意事项

 

1. 本试剂盒中的多种缓冲液含有刺激性的胍盐，务必戴上手套，并按照安全标准预防措施来处理。不要让缓冲液接触到皮肤、眼睛以及黏膜，如果确实发生，请立即用大量清水清洗并就医。
2. 如因气温较低，溶液出现沉淀，需要30℃水浴至沉淀完全溶解后方可使用。
3. 如因气温较低，裂解液出现沉淀，可60℃水浴至沉淀完全溶解后使用。
4. 如因气温较低，用力振荡后磁珠无法重悬，请勿使用。
5. 本试剂盒中的多种缓冲液含胍盐，请勿用氧化性消毒剂如次氯酸钠进行处理，否则会释放有毒气体，须按医疗废物进行处理。
6. 本产品仅作科研用途！

 

操作方法 

 

1试剂准备

1.1实验前检查溶液是否有沉淀，磁珠是否能重悬。

1.2溶解RNase A (10 mg/mL)：18565ES24加入0.3 mL酶溶解液，18565ES48加入0.6 mL酶溶解液，溶解RNase A至终浓度为10 mg/mL，颠倒混匀/轻柔涡旋让RNase A充分溶解，溶解后的RNase A须保存于-20~8℃。

2操作步骤

磁分离操作建议（步骤2.9开始）：离心管置于磁力架后，轻轻地左右旋转，待磁珠聚集于贴近磁力架的管壁后，轻轻地颠倒磁力架数次，使管盖上的磁珠也聚集到管壁，静置数分钟至溶液澄清即可（静置时长视磁力架磁性而定）。

2.1取0.5~1 mL细菌/真菌培养液（约10⁶~10⁹个菌）于1.5 mL离心管，10,000×g离心1 min，收集细菌，尽量吸弃上清。

2.2根据不同样本类型选择对应步骤进行处理

A.非真菌类、易裂解细菌DNA提取：加入200~300 μL裂解液和20 μL蛋白酶K，高速涡旋1 min混匀。

易裂解细菌：革兰氏阴性菌如大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌、流感嗜血杆菌、嗜肺军团菌、百日咳杆菌、霍乱弧菌等。

B.真菌类、难裂解细菌DNA提取：加入350~450 μL裂解液和20 μL蛋白酶K，涡旋混匀后瞬时离心，将所有溶液转至研磨管中，在涡旋仪最大转速涡旋或转移至震荡破碎仪高速研磨样本10~15 min（不同品牌震荡破碎仪，请选择仪器推荐程序）。

真菌：酵母菌、假丝酵母、黄曲霉、白地霉、抗生菌等。

难裂解细菌：革兰氏阳性菌如葡萄球菌、肠球菌、链球菌、肺炎双球菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、破伤风杆菌等。

2.3  65℃振荡温浴15~30 min，若恒温仪无振荡功能，可在温浴期间每5 min取出涡旋1次，每次10~20 s。

2.4加入10 µL RNase A至消化液中，涡旋混匀后室温放置10~15 min（如样本量过大造成RNA残留，此时建议降低样本量）。

2.5若裂解后样本出现浑浊，可涡旋混匀后10,000×g离心1 min；若裂解后溶液清澈透明，涡旋混匀后瞬时离心。

备注：如木霉菌等真菌离心后上清有颜色，可额外咨询我司沉淀液，按以下流程操作：取300 μL离心后上清到新的离心管中，加入100 μL沉淀液混匀后，4℃冰浴10 min，10,000×g离心3 min。

2.6将上清转至新的1.5 mL离心管，小心吸取，避免吸到沉淀（否则可能导致RNA残留）。

2.7加入600 µL裂解结合液，高速涡旋混匀10 s。

2.8加入20 µL磁珠悬浮液，振荡或涡旋5~7 min使磁珠吸附DNA。

2.9转移至磁力架上进行磁分离至溶液澄清，吸弃溶液。

2.10加入700 µL洗涤液A，浸泡30 s，涡旋10 s打散磁珠后转至磁力架进行磁分离至溶液澄清，吸弃溶液。

2.11加入700 µL洗涤液B，涡旋10 s打散磁珠后转至磁力架进行磁分离至溶液澄清，吸弃溶液。

2.12加入700 µL洗涤液C，涡旋10 s打散磁珠后转至磁力架进行磁分离至溶液澄清，吸弃溶液。

2.13掌上离心机瞬时离心后，转至磁力架上吸附至溶液澄清，充分吸弃所有溶液，打开管盖，空气干燥3~5 min。

注意：乙醇残留会抑制后续的酶反应，晾干时要确保乙醇挥发干净。切勿干燥过久，以免影响后续洗脱效果。

2.14加入50~100 µL 洗脱液，高速涡旋2~3 min打散磁珠。

2.15  60℃温浴5 min，然后高速涡旋30 s。重复洗脱1次可增加产量。

2.16瞬时离心收集管盖液滴至管中，转移至磁力架上进行磁分离至溶液澄清。

2.17把基因组DNA溶液转移至新的离心管中待用。如果不立即使用，请存储于-15~-25℃，长期保存请放置于-70℃或更低的温度。

 

Ver.CN20240724