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产品简介
MolPure® Magnetic FFPE DNA Kit适用于从福尔马林固定石蜡包埋组织（FFPE）中分离纯化出高质量的DNA。本试剂盒使用非二甲苯脱蜡液，安全、简单、快速地提取基因组DNA，提取产物适用于各种下游应用实验，如 qPCR 和二代测序等。本产品可配合磁珠法自动化提取仪使用，实现核酸的高通量提取。
产品信息
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货号 |
18375ES50 |
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规格 |
50 T |
组分信息
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类别 |
组分编号 |
组分名称 |
18375ES50 |
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PartⅠ |
18375-A |
蛋白酶K溶液（20 mg/mL） |
1 mL/支×2 |
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18375-B |
磁珠悬浮液 |
1 mL/支×1 |
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PartⅡ |
18375-C |
脱蜡液 |
18 mL/瓶×1 |
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18375-D |
裂解液 |
12 mL/瓶×1 |
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18375-E |
结合液 |
15 mL/瓶×1 |
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18375-F |
洗涤液A |
18 mL/瓶×1 |
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18375-G |
洗涤液B |
20 mL/瓶×1 |
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18375-H |
洗涤液C |
18 mL/瓶×1 |
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18375-I |
洗脱液 |
5 mL/瓶×1 |
注意：使用前洗涤液A（18375-F）每瓶需加入27 mL无水乙醇，洗涤液C（18375-H）每瓶需加入72 mL无水乙醇。
储存条件
1.PartⅠ室温运输，4℃保存，有效期12个月；
2.PartⅡ室温运输，室温避光保存，有效期12个月。
实验前准备
- 第一次使用前应按试剂瓶标签说明在洗涤液A和洗涤液C中加入无水乙醇 ，充分混匀后使用，并在标签的方框中打勾做好“乙醇已加”的标记。
- 实验开始前将水浴锅或金属浴预热至60℃。
- 使用前请检查脱蜡液、裂解液和结合液是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请于56℃水浴重新溶解。
操作方法
一、样本前处理
1. 用手术刀切除石蜡组织标本上多余的石蜡，将组织块切成5～10 μm的薄片。
注意：如果组织表面暴露在空气中，须丢弃开始的2-3片组织切片。
- 收集1～8片组织切片装入一个1.5 mL离心管中，加入300 μL脱蜡液，60℃ 孵育6 min，立即涡旋 20 s让石蜡充分溶解。
- 依次加入225 μL裂解液，20 μL蛋白酶K溶液，涡旋振荡10 s，12000 rpm，25℃离心1 min。
注意：a. 如果样品量多可增加脱蜡液至500 μL。
b. 脱蜡液低于18℃会凝固，如果凝固请于56℃水浴锅加热复溶。
4. 60℃孵育1 h（期间可以旋涡振荡数次帮助组织溶解）。
5. 90℃水浴1 h（60℃孵育后的样品可置于室温，直至水浴锅或金属浴温度达到90℃后再把样品置于90℃孵育）。
6. 12,000 rpm离心1 min，使用 200 μL 枪头沿管壁小心吸取下层水相200 μL到新的1.5 mL离心管中。
7. （选做）若残留 RNA 对后续实验有影响，可加入 5 μL RNase A 溶液(100 mg/mL)（自备，Yeasen Cat No.10406），振荡混匀，室温放置 5-10 min。
8. 加入20 μL 蛋白酶K溶液，涡旋混匀10 s，短暂离心后于65℃孵育15 min。
9. 短暂离心后即得到待用样本混合液。
二、手动提取步骤
1. 向上述待用样本混合液加入300 μL结合液，350 μL异丙醇，涡旋混匀。
2. 加入20 μL磁珠悬浮液，涡旋混匀，置于旋转混匀仪上孵育10 min。
注意：磁珠悬浮液使用前需充分涡旋混匀，保证磁珠彻底重悬，每加样几次后需充分摇匀后继续加样。
- 短暂离心后，将离心管置于磁力架上静置，待磁珠完全吸附，小心吸弃液体。
- 加入700 μL 洗涤液A（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），涡旋混匀2 min，确保磁珠分散。
- 短暂离心后，将离心管置于磁力架上静置，待磁珠完全吸附，小心吸弃液体。
- 加入400 μL 洗涤液B，涡旋混匀1 min，室温静置3 min。
- 短暂离心后，将离心管置于磁力架上静置，待磁珠完全吸附，小心吸弃液体。
- 加入700 μL 洗涤液C（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），涡旋混匀2 min，确保磁珠分散。
- 短暂离心后，将离心管置于磁力架上静置，待磁珠完全吸附，小心吸弃液体。
- 重复“二、手动提取步骤”中的步骤8和9。
- 再次离心，尽量吸出残留液体，将离心管敞口室温放置5 min，使乙醇挥发干净。
注意：晾干至磁珠表面刚出现龟裂即可，过度干燥不利于核酸洗脱。
- 将离心管从磁力架上取下，加入70 μL洗脱液，涡旋混匀。短暂离心后，65℃孵育8 min，期前可涡旋混匀以提高洗脱效率。
- 短暂离心后，将离心管置于磁力架上静置，待磁珠完全吸附，小心将DNA溶液转移至新的离心管中，注意不要吸到
磁珠。
- 核酸溶液保存于-20℃，长期保存需放置于-80℃。
Ver.CN20240311
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