LwaCas13a Nuclease(10 μM) LwaCas13a RNA内切核酸酶（14709ES）

LwaCas13a Nuclease是一种来源于Leptotrichia wadei 的 RNA 引导的 RNA 内切核酸酶，其活性依赖于 RNA 介导的识别机制。在靶标单链 RNA（ssRNA）存在合适的 PFS（protospacer flanking site）序列的前提下，LwaCas13a 可通过 crRNA 的引导特异性识别并切割靶标 ssRNA。

此外，LwaCas13a 还具有依赖于靶标单链 RNA 的反式切割活性（即旁路切割活性），该活性仅在LwaCas13a与crRNA、靶标ssRNA形成三元复合物后才被触发。一旦被激活，该酶不仅能高效切割靶标 RNA，还会非特异性地降解反应体系中任意序列的单链 RNA。基于这一“信号放大”特性，LwaCas13a 被广泛用于开发针对靶标核酸的快速检测试剂盒，在分子诊断领域具有重要的应用价值。

基于上述特性，LwaCas13a Nuclease 可广泛应用于以下应用场景：

• 体外高灵敏度 RNA 检测：依托靶标激活的反式切割活性，LwaCas13a 可将分子识别信号转化为可放大的荧光或侧向层析信号。搭配恒温扩增技术，能够实现病毒 RNA、病原菌 RNA 及痕量转录本的阿摩尔（aM）级检测，是 SHERLOCK 等 CRISPR 核酸检测体系的关键工具酶。^[1,2]
• 细胞内 RNA 靶向调控与敲低：LwaCas13a 可在哺乳动物、植物细胞中异源表达，靶向降解报告基因或内源转录本，完成基因表达敲低。^[5]。体外 RNA 定点切割：可作为 RNA 定点切割工具，应用于 RNA 加工与体外分子操作实验。

• 靶标依赖高效反式切割，保障 RNA 检测信号放大能力

图1. LwaCas13a Nuclease 反式切割活性验证

注：20 μL 反应体系，各组分终浓度 / 用量：1×Cas13a Reaction Buffer、50 nM crRNA、500 nM Cas13 ssRNA Reporter、5 ng/μL 转录 RNA、1 U/μL Murine RNase Inhibitor；LwaCas13a Nuclease 1 pmol（终浓度 50 nM），DEPC 水补足至 20 μL。设置阴性对照：①不加转录 RNA；②不加 crRNA。37℃反应并实时采集荧光。仅靶标 RNA 与 crRNA 共存的体系出现显著荧光信号，说明反式切割活性需要 crRNA 与靶标 ssRNA 共同激活。

• 三重核酸酶残留质控，降低杂酶干扰，实验重复性更优

图2. LwaCas13a Nuclease 核酸酶残留检测结果

注：以对照（C）与 LwaCas13a Nuclease 分别与相应核酸底物于 37℃ 孵育 4 h 后进行琼脂糖凝胶电泳检测，样品组电泳条带与对照一致，未见核酸内切酶、核酸外切酶及 RNase 残留引起的降解或拖尾。

-25~-15℃保存，有效期2年。