Annexin V-Alexa Fluor647/PI细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-Alexa Fluor647/PI Apoptosis Detection Kit）是用Alexa Fluor647标记了的Annexin V作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。

其检测原理为：在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin V（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca²⁺ 依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

另外，本试剂盒中还提供了碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此，将Annexin V与PI联合使用时，PI 则被排除在活细胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被Alexa Fluor647 和PI 结合染色呈现双阳性（Annexin V+/PI+）。

本试剂盒需要使用流式细胞仪进行检测。

检测便捷准确

冰袋（wet ice）运输。-20 ℃避光保存，避免反复冻融，一年有效期。

【注】：如果需要在短时间内多次重复使用，可以在4 ℃避光保存，半年有效期。

Q：染色结果可以使用多功能酶标仪观察吗？

A：可以，建议如果条件允许最好是使用荧光显微镜或是共聚焦显微镜 流式仪器。

Q：染色后多久进行？

A：建议染色后应立即进行观察，应当在 30min 内完成整个实验观察过程。

Q：染色工作液使用什么溶液进行配置？

A：如果试剂盒内提供有稀释 buffer，应使用该溶液配置，如果没有配备，可以使用 HBSS 无血清培养基 PBS 等合适的缓冲液进行配置。

Q：染色时添加多少体系的工作液进行染色？

A：如果是爬片观察，添加的剂量应是尽量浸没细胞为宜，如果采用流式观察使用剂量可以参考说明 书建议的用量。

Q：40307 Tunel 细胞凋亡检测的可以应用到植物或是细菌（原核生物）吗？

A：可以，但是需要制备原生质体，因为植物细胞或是细菌（原核生物）含有细胞壁，具体的染液使 用剂量只需浸没细胞即可，染色时间对于不同细胞有一定的不同。

Q：40307 Tunel 细胞凋亡检测，细胞爬片好凋亡处理后需要在固定通透吗？

A：需要通透，因为 TdT 酶需要经过通透的细胞才能进入细胞内，而 Annexin V 和JC-1 是不能进行染 色固定的。

Q：Tunel 细胞凋亡检测时，贴壁细胞必须要先消化下来再染色吗？

A：不需要，对于贴壁细胞，要先用 PBS 洗 2-3 次，然后直接用多聚甲醛固定细胞，在通透处理，染 色观察。

Q：可以通过那些仪器检测tunel 荧光信号？

A：荧光显微镜 共聚焦显微镜 流式细胞仪 酶标仪均可以检测tunel 荧光信号。

Q：Tunel 检测在实验操作上有哪些注意事项？

A：荧光基团长期暴露在普通光照下，会发生严重淬灭现象，因此在实验操作上应尽量避光操作和孵育。

Q：0：Tunel 检测除了多聚甲醛固定，可不可以使用甲醇固定？

A：使用乙醇或甲醇固定会导致标记的效率较低。酸性固定液，也容易导致假阳性的出现。建议采用新鲜配置的 4%中性多聚甲醛固定液。

Q：试剂盒的保质期多久？

A：对于探针类的试剂在规定的保存条件下保质期是一年左右。

Q：荧光显微镜检测时发现荧光较弱，怎么办？

A：对于荧光较弱的情况可以适当的增加孵育时间和工作液浓度，对于细胞也尽量选择状态较好的细 胞进行染色观察。

Q：为什么我激发后荧光很快就猝灭了？

A：可能是使用浓度过高造成，可以再适当降低一些试剂浓度；可以在寻找视野时使用低能量的激光， 待找到合适视野时使用高能量激光激发观察；或者是使用抗猝灭剂。

Q：两个试剂的浓度分别是多少？

A：AnnexinV浓度时0.4mg/ml，PI浓度时20ug/ml。