Annexin V-YSFluorTM 488/PI Apoptosis Detection Kit Annexin V-YSFluorTM 488/PI 细胞凋亡检测试剂盒

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产品信息

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价格(元)

促销价(元)

nnexin V- YSFluorTM 488/PI Apoptosis Detection Kit  

Annexin V- YSFluorTM 488/PI 细胞凋亡检测试剂盒  

40305ES20

20 T

518.00

388.00

40305ES50

50 T

1120.00

788.00

40305ES60

100 T

1960.00

1348.00

 

产品描述

Annexin V-YSFluorTM 488/PI细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-YSFluorTM 488/PI Apoptosis Detection Kit)是用YSFluorTM 488标记了的Annexin V作为探针,来检测细胞早期凋亡的发生,可用流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。

其检测原理为:在正常的活细胞中,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserinePS)位于细胞膜的内侧,但在早期凋亡的细胞中,PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KDCa2+ 依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

另外,本试剂盒中还提供了碘化丙啶(Propidium IodidePI)用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料,它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜,但可以透过凋亡晚期和坏死细胞细胞膜而使细胞核染红。因此,将Annexin VPI联合使用时,PI 则被排除在活细胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡细胞(Annexin V+/PI-)之外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被YSFluorTM 488 PI 结合染色呈现双阳性(Annexin V+/PI+)。

 

产品组分

编号

组分

产品编号/规格

40305ES2020T)

40305ES5050T

40305ES60100T

40305-A

Annexin V-YSFluorTM 488

100 μL

250 μL

500 μL

40305-B

PI Staining Solution (20 μg/mL)

200 μL

500 μL

1.0 mL

40305-C

1×Binding Buffer

10 mL

25 mL

50 mL

 

运输与保存方法

冰袋(wet ice)运输。-20 ℃避光长期保存,避免反复冻融,一年有效。

【注】:如果需要在短时间内多次重复使用,可以在 4 ℃避光保存,半年有效。

 

注意事项

1)由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。

2对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-YSFluorTM 488的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后,轻摇时胰酶与细胞充分接触,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余的少量胰酶再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTAEDTA会影响Annexin VPS的结合。

3)如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。

4)试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。

5Annexin V-YSFluorTM 488PI是光敏物质,在操作时请注意避光。

6)本产品仅作科研用途!

 

使用说明

1.1 样品染色

1. a悬浮细胞:300 g4离心5 min收集细胞。

b贴壁细胞:用不含EDTA的胰酶消化后,300 g4离心5 min收集细胞。胰酶消化时间不宜过长,以防引起假阳性。

2. 4℃预冷的PBS洗涤细胞2次,每次均需300g4离心5 min

3. 吸弃PBS,加入100μL 1×Binding Buffer重悬细胞。

4. 加入L Annexin V-YSFluorTM 48810 μL PI,轻轻混匀。

5. 避光、室温反应15 min

6. 加入400 μL 1×Binding Buffer,混匀,样品在1小时内用流式细胞仪检测。

【注】:为了避免洗涤细胞时损失细胞,在吸液时可以用大的Tip头套上小的Tip头吸液。

1.2 流式细胞仪分析

YSFluorTM 488最大激发波长为488 nm,最大发射波长为519 nmPI-DNA复合物的最大激发波长为535 nm,最大发射波长为615 nm。用CellQuest等软件进行分析,绘制双色散点图(two-color dot plotYSFluorTM 488为横坐标,PI为纵坐标。每个样采集10,000 events

1.3 荧光显微镜分析

1) 滴一滴用Annexin V-FITC/PI双染的细胞悬液于载玻片上,并用盖玻片盖上细胞。

2) 在荧光显微镜下用双色滤光片观察。Annexin V-FITC荧光信号呈绿色,PI荧光信号呈红色。

HB240313

 

400-6111-883