您好,欢迎来到YEASEN!
400-6111-883
400-6111-883
Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒
产品货号:40302ES20
产品规格:20T
产品价格:¥ 480.00
类别:细胞凋亡与吞噬

说明书下载

  • 产品信息

     

    产品名称

    货号

    规格

    价格(元)

    促销价(元)

    Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

    Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒

    40302ES20

    20T

    480.00

    366.00

    40302ES50

    50T

    960.00

    686.00

    40302ES60

    100T

    1680.00

    986.00

     

    产品描述

     

    Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒是用FITC标记的Annexin V作为探针,来检测细胞早期凋亡的发生。

    其检测原理为:在正常的活细胞中,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在早期凋亡的细胞中,PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36 kDaCa2+ 依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

    另外,本试剂盒中还提供了碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料,它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜,但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此,将Annexin V与PI联合使用时,PI 则被排除在活细胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡细胞(Annexin V+/PI-)之外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被FITC 和PI 结合染色呈现双阳性(Annexin V+/PI+)。

    本试剂盒可用于流式细胞仪、荧光显微镜进行检测。

     

    产品组分

     

    编号

    组分

    产品编号/规格

    40302ES20(20T)

    40302ES50(50T)

    40302ES60(100T)

    40302-A

    Annexin V-FITC

    100 μL

    250 μL

    500 μL

    40302-B

    PI Staining Solution

    200 μL

    500 μL

    1.0 mL

    40302-C

    1×Binding Buffer

    10 mL

    25 mL

    50 mL

     

    运输与保存方法

     

    冰袋(wet ice)运输。-20℃避光保存,避免反复冻融,一年有效。

    【注】:如果需要在短时间内多次重复使用,可以在4℃避光保存,半年有效。

     

    注意事项

     

    1)由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。

    2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤。胰酶消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤;PI摄入过多,消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后,轻摇使胰酶与细胞充分接触,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余少量胰酶再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。

    3)如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可


    以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。

    4)试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。

    5Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。

    6)本产品仅作科研用途!

     

    操作方法

     

    1.1 样品染色

    1)悬浮细胞300 g,4℃离心5 min收集细胞。

    贴壁细胞:用不含EDTA的胰酶消化后,300 g,4℃离心5 min收集细胞。胰酶消化时间不宜过长,以防引起假阳性。

    2)用预冷的PBS洗涤细胞2次,每次均需300 g,4℃离心5 min。收集1~5×105细胞。

    3)吸弃PBS,加入100 μL 1×Binding Buffer重悬细胞。

    4)加入5 μL Annexin V-FITC和10 μLPI Staining Solution,轻轻混匀。

    5)避光、室温反应10-15 min。

    6)加入400 μL 1×Binding Buffer,混匀后放置于冰上,样品在1小时内用流式细胞仪或荧光显微镜检测。

    【注】:为了避免洗涤细胞时损失细胞,在吸液时可以用大的Tip头套上小的Tip头吸液。

    1.2 样品分析

    A.流式细胞仪分析:

    FITC最大激发波长为488 nm,最大发射波长525 nm,FITC的绿色荧光在FL1通道检测;PI-DNA复合物的最大激发波长为535 nm,最大发射波长为615 nm,PI的红色荧光在FL2或FL3通道检测。用CellQuest等软件进行分析,绘制双色散点图(two-color dot plot),FITC为横坐标,PI为纵坐标。典型的实验中,细胞可以分成三个亚群,活细胞仅有很低强度的背景荧光,早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光,晚期凋亡细胞有绿色和红色荧光双重染色。

    B.荧光显微镜分析:

    1)滴一滴用Annexin V-FITC/PI双染的细胞悬液于载玻片上,并用盖玻片盖上细胞。

    【注】:对于贴壁细胞,可直接用盖玻片培养细胞并诱导细胞凋亡。

    2)在荧光显微镜下用双色滤光片观察。Annexin V-FITC荧光信号呈绿色,PI荧光信号呈红色。


    相关产品

    产品名称

    货号

    规格

    价格(元)

    促销价(元)

    Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit

    细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒

    40301ES50

    50 T

    298.00

    -

    40301ES60

    100 T

    528.00

    -

    Annexin V-EGFP/PI 细胞凋亡检测试剂盒

    Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit

    40303ES20

    20 T

    480.00

    386.00

    40303ES50

    50 T

    960.00

    786.00

    40303ES60

    100 T

    1680.00

    1346.00

    Annexin V-Alexa Fluor 647/PI 细胞凋亡检测试剂盒

    Annexin V-Alexa Fluor 647/PI Apoptosis Detection Kit

    40304ES20

    20 T

    518.00

    386.00

    40304ES50

    50 T

    1120.00

    786.00

    40304ES60

    100 T

    1960.00

    1346.00

    Annexin V-Alexa Fluor 488/PI 细胞凋亡检测试剂盒

    Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit

    40305ES20

    20 T

    518.00

    386.00

    40305ES50

    50 T

    1120.00

    786.00

    40305ES60

    100 T

    1960.00

    1346.00

    Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒

    Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit

    40310ES20

    20 T

    480.00

    386.00

    40310ES50

    50 T

    960.00

    786.00

    40310ES60

    100 T

    1680.00

    1346.00


    HB220609