细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200 bp的DNA ladder。

TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling)细胞凋亡检测试剂盒（FITC）可以用来检测组织细胞在凋亡晚期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是在末端脱氧核糖核苷酸转移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）的作用下，在基因组DNA断裂时暴露出的3´-羟基（3´-OH）末端掺入FITC-12-dUTP，从而可以用荧光显微镜或流式细胞仪检测。

本试剂盒对标记反应进行了优化，采用最佳比例的FITC-12-dUTP和未标记dNTP进行3’-OH末端的核苷酸掺入，使得同一个断裂的DNA片段末端可以形成更长的“标记尾巴”。该“标记尾巴”减少了相邻掺入dNTP上标记基团的空间位阻，增加每个断裂片段上的荧光基团数目，降低荧光基团相邻后可能造成的聚集和淬灭，从而提高检测灵敏度，减少非特异性反应。

应用范围广，可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。

冰袋（wet ice）运输。

本试剂盒储存在-20℃，FITC-12-dUTP Labling Mix避光储存于-20℃，保质期为二年。

Q：共染之后TUNEL 的信号就不在核内了，感觉都弥散了。TUNEL 染色就按照说明书来的，DAPI 之前孵育另外的一抗？

A：可能是后期洗涤次数过多，建议减少洗涤次数，或者洗涤动作轻柔一些。

Q：TUNEL 可以和 DAPI 一起染色细胞吗?

A：可以。

Q：Annexin V 和 JC-1、Tunel 细胞凋亡检测的区别？

A： Annexin V 是检测细胞早期凋亡的试剂，JC-1 是检测细胞中期凋亡的试剂、Tunel 是检测细胞晚期凋亡的试剂。

Q：Annexin V 和JC-1、Tunel 细胞凋亡检测的可以应用到植物或是细菌（原核生物） 吗？

A：可以，但是需要制备原生质体，因为植物细胞或是细菌（原核生物）含有细胞壁，具体的染液使用剂量只需浸没细胞即可，染色时间对于不同细胞有一定的不同。

Q：Tunel 细胞凋亡检测，细胞爬片好凋亡处理后需要在固定通透吗？

A：需要通透，因为 TdT 酶需要经过通透的细胞才能进入细胞内，而 Annexin V 和 JC-1 是不能进行染色固定的。

Q：Tunel 细胞凋亡检测时，贴壁细胞必须要先消化下来再染色吗？

A：不需要，对于贴壁细胞，要先用PBS 洗 2-3 次，然后直接用多聚甲醛固定细胞， 通透处理，染色观察。

Q：固定时间可以增加吗？

A： 4℃放置25 min左右，选择4%多聚甲醛作固定液，乙醇、甲醇、酸性固定液，会导致标记效率低；固定时间不宜过长，过长导致交联程度过高，进而降低标记效率。

Q：使用流式进行染色和检测时是否一定需要染PI（碘化丙啶）？

A： 在流式中，对于TUNEL检测PI是非必须的，通常可不染PI。