Tn5 Transposase是野生型Tn5转座酶的突变形式。Tn5转座酶是Tn5转座子的核心酶，具有高效的切割和插入活性。Tn5转座酶识别其转座子序列的内端(inside end, IE)、外端(outside end, OE)和嵌合端(mosaic end, ME)序列。利用其转座原理，能携带核酸打断并连接入底物核酸序列中，形成打断和插入机制，广泛应用于体外转基因以及转座酶法建库中。

 

组分信息

组分名称	14524ES60	14524ES76
Tn5 Transposase (10 U/μL)	10 μL	50 μL

 

储存条件

-85~-65℃保存，有效期1年。

 

使用说明

以高通量测序建库为例，在使用前，请务必仔细阅读使用说明。

1. 接头制备

1）Illumina平台参考引物名称及序列：

 Primer A：5'-phos-CTGTCTCTTATACACATCT-NH₂-3'

 Primer B：5′-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3′

 Primer C：5′-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG-3′

2）使用Annealing Buffer溶解Primer A、Primer B、Primer C至100 μM。

3）分别配制如下反应体系：

组分	反应1
Primer A（100 μM）	10 μL
Primer B（100 μM）	10 μL
total	20 μL

 

组分	反应2
Primer A（100 μM）	10 μL
Primer C（100 μM）	10 μL
total	20 μL

4）分别将反应1和反应2涡旋振荡充分混匀，并短暂离心使溶液回到管底。置于PCR仪内，进行如下反应程序：热盖105℃ On，94℃加热2 min。时间到后，停止反应程序，不要打开热盖，让PCR管在PCR仪器中自然冷却2 h，然后再于4℃中放置5 min。

5）反应结束后，将反应1和反应2等体积混合，混匀。命名为Adapter Mix，-25~-15℃保存。

2．转座子生成

1） 配置以下反应体系：

组分	体积（μL）
Tn5 Transposase (10 U/μL)	2
Adapter mix (25 μM)*	1.6
Assemble Buffer	Up to 20

*Adapter mix根据实验目的以及测序平台，自备。

2）反应条件：使用移液器轻轻吹打充分混匀。置于25℃反应1 h（热盖关闭）。反应产物命名为Tn5 Mix，可直接应用于建库实验，或-25~-15℃保存。

3. DNA片段化测试

1）配置以下反应体系：

组分	体积（μL）
Input DNA (50 ng/μL)	X*
5×Tagment buffer	4
Tn5 Mix	1**
ddH2O	Up to 20

*DNA 使用量越大，片段化产物平均长度越长；反之，片段化产物平均长度越短。

**如需提高打断程度，可提高Tn5 Mix使用量；反之，可减少酶使用量。

2）片段化反应程序

轻轻吹打或振荡混匀，短暂离心。按照下表所示反应程序，进行片段化反应。

温度	时间
热盖105℃	On
55°C	10 min
4°C	Hold

3）DNA片段化终止

配置以下反应体系，在上述片段化产物中添加下表中各反应组分，使用移液器轻轻吹打20次混匀。

组分	体积（μL）
片段化产物	20
6×Terminate Solution	4
Total	24

按照下表所示反应程序，进行终止反应。

温度	时间
热盖105℃	On
55°C	10 min
4°C	Hold

待样品温度降到4°C后，取出PCR管，进行片段化产物纯化，可以选择1.2×磁珠纯化，推荐使用Hieff NGS® DNA Selection Beads（Cat#12601ES），最终使用21 μL ddH₂O洗脱片段化产物。请勿使用TE等含金属离子络合剂的缓冲液洗脱片段化产物！

4）片段化产物质量控制

a. 使用 Qubit 进行浓度测定。

b. 使用 Agilent Technologies 2100 Bioanalyzer 进行长度分布检测。

5）片段化产物扩增

可根据具体的实验目的与测序平台选择合适的试剂进行扩增实验。

 

注意事项

1. 转座酶对温度敏感，建议尽快完成接头包埋，生成的转座子可于-25~-15℃保存，有效期1年。

2. 本产品仅作科研用途。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

4. 该产品不提供Buffer，如需转座酶加Buffer，可采购Cat#12900ES。

Ver.CN20230822