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COA
已发表文献
Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase是一种基于Pfu DNA Polymerase改造而成的新一代高保真DNA聚合酶，和Pfu DNA Polymerase相比，Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase的性能得到大幅度提升，针对复杂的模板也能快速准确的完成PCR反应。其保真性显著提高，且解决了常规高保真酶无法以dUTP为原料进行聚合反应、无法使用含有dUTP的扩增引物以及无法使用含有dUTP的DNA作为扩增模板等诸多问题。本产品配备了优化后的酶缓冲液，添加了PCR增强组分，使得该酶具有极强的扩增效率和广泛的模板适应性，适合复杂模板的扩增。其扩增产物为平末端。
产品组分
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组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
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10145ES60 |
10145ES76 |
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10145-A |
Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA Polymerase(1 U/μL) |
100 μL |
500 μL |
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10145-B |
2×Canace® Uracil+ PCR buffer (含Mg2+，dNTPs) |
3×1 mL |
15×1 mL |
运输和保存方法
冰袋运输。-20°C保存，有效期1年。
产品应用
使用含dUTP的引物进行高保真文库扩增；
使用含dUTP的模板进行高保真文库扩增；
使用含dUTP的dNTP进行高保真文库扩增。
注意事项
1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 本产品仅作科研用途！
使用方法
Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase与常规高保真酶的使用方法略有不同。在使用前，请务必仔细阅读使用说明。
1. 推荐反应体系
所有操作应于冰上进行，2×Canace® Uracil+ PCR buffer解冻后请充分混匀。体系配置之前请预热PCR仪，各组分添加完成之后用移液器吸打充分混匀并短暂离心至管底，然后置于预热的PCR仪中进行反应。所有组份使用完毕之后及时放回-20 °C保存。
表1. PCR扩增反应体系
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组分 |
体积 (µL) |
|
模板DNA |
X |
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2×Canace® Uracil+ PCR buffer (含Mg2+，dNTPs) |
25 |
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正向引物 (10-25 μM） |
1-2.5 |
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反向引物 (10-25 μM） |
1-2.5 |
|
Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase（1 U/µL） |
1 |
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ddH2O |
Total to 50 |
【注】：
1) 模板：使用纯化后的高质量DNA模板可以显著提高扩增效率和成功率。
2) dNTPs：反应体系中dNTPs使用终浓度为200 μM。试剂盒中提供的dNTPs中不含dUTP，如特殊情况下需要制备含dUTP的模板，可自行额外添加dUTP至终浓度为400 μM。
3) 聚合酶浓度：在50 μL体系中，推荐使用1 U，可以在0.5-2 U之间进行优化，请勿超过2 U。为了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物，建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。
4) Mg2+终浓度：反应体系中Mg2+终浓度为2 mM。如有特殊需要，可向我公司咨询，要求提供低Mg2+浓度或不含Mg2+的buffer。
2．推荐反应程序
表2. PCR扩增反应程序
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温度 |
时间 |
循环数 |
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98°C |
1 min |
1 |
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98°C |
10 sec |
1-15（根据实验要求） |
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60°C |
30 sec |
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72°C |
30 sec |
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72°C |
5 min |
1 |
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4°C |
Hold |
- |
【注】：
1)预变性温度推荐使用98°C。预变性推荐时间：质粒DNA等简单模板为30 sec；文库为1 min；cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min；高GC含量模板为5-10 min。
2) 退火温度推荐使用60°C，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
3) 延伸温度和时间：推荐使用72°C，延伸时间根据实际需要进行调整。
HB221220
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