产品简介

 

Tn5转座酶特异性识别转座子两端反向重复的ME序列(Mosaic End)，形成转座复合体后随机的将转座子插入靶DNA中。 Protein A 偶联转座酶(Protein A-Tn5) , 即通过将Protein A与改造的超高活性Tn5转座酶融合，形成兼具双重活性的新型融合酶(pA-Tn5Transposase)，可在抗体引导下精准靶向切割目的蛋白附近的DNA序列，适用于CUT&Tag(Cleavage Under Targets and Tagmentation)技术。CUT&Tag是替换传统的ChIP-Seq用以研究蛋白质-基因组互作的新技术，与后者相比，它具有显著优势，如：信噪比高，可重复性好，实验周期短（1天实现从细胞到文库构建），细胞投入量低等，该方法适用于表观遗传学、肿瘤、干细胞等研究领域。

 

组分信息

 

组分编号	组分名称	14528ES58	14528ES66
14528-A	pA-Tn5 Transposase (10 U/μL)	8 μL	16 μL
14528-B	Assemble Buffer	1 mL	2×1.25 mL
14528-C	5×Tagment buffer*	1 mL	2×1.25 mL
14528-D	6×Terminate Solution	1 mL	2×1.25 mL

*5×Tagment buffer 含Mg²⁺，用于测试制备的转座子片段化DNA的效果，而非CUT&Tag工作Buffer。

 

储存条件

 

组分A应于-85~-65℃保存，其余组分-25~-15℃保存，有效期1年。

 

注意事项

 

1. 转座酶对温度敏感，请在接收货物后建议尽快完成接头包埋，生成的转座子可以放置于-20℃保存。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3. 本产品仅用作科研用途。

 

使用方法

 

以高通量测序建库为例，在使用前，请务必仔细阅读使用说明。

1. 转座子生成

1.1 配置以下反应体系

组分	体积(μL)
pA-Tn5 Transposase (10 U/μL)	2
Adapter mix (100 μM)*	0.4
Assemble Buffer	Up to 20

*Adapter mix根据实验目的以及测序平台，自备。

1.2 反应条件

使用移液器轻轻吹打充分混匀，置于25℃反应1 h（热盖关闭）。反应产物命名为pA-Tn5 Mix，可直接应用于建库实验，或-20℃保存。

2. DNA片段化测试

2.1 配置以下反应体系

组分	体积(μL)
Input DNA (50 ng/μL)*	X
5×Tagment buffer	4
pA-Tn5 Mix**	1
ddH2O	To 20

*DNA 使用量越大，片段化产物平均长度越长；反之，片段化产物平均长度越短。

**如需提高打断程度，可提高pA-Tn5 Mix使用量；反之，可减少酶使用量。

2.2 片段化反应程序

轻轻吹打或振荡混匀，短暂离心。将上述PCR管置于PCR仪，按照下表所示反应程序，进行片段化反应。

温度	时间
热盖105℃	On
55°C	10 min
4°C	Hold

2.3 DNA片段化终止

配置以下反应体系，在上述片段化产物中添加下表中各反应组分，使用移液器轻轻吹打20次混匀。

组分	体积（μL）
片段化产物	20
6×Terminate Solution	4
Total	24

按照下表所示反应程序，进行终止反应。

温度	时间
热盖105℃	On
55°C	10 min
4°C	Hold

待样品温度降到4°C后，取出PCR管，进行片段化产物纯化，可使用21 μL ddH₂O 进行洗脱。
2.4. 片段化产物质量控制
a) 使用 Qubit 进行浓度测定。
b) 使用 Agilent Technologies 2100 Bioanalyzer 进行长度分布检测。
2.5 片段化产物扩增
可根据具体的实验目的与测序平台选择合适的试剂进行扩增实验。

 

Ver.CN20241230