Multi-CUT&Tag实验文库构建试剂盒(Multi-CUT&Tag Library Prep Kit)（12592ES）

Hieff NGS® Multi-CUT&Tag Library Prep Kit for Illumina® V2

多靶标CUT&Tag试剂盒（Nanobody-Tn5款）

• 一份样本，一次实验，多个靶标。节省时间和样本。信噪比高。

Hieff NGS® Multi-CUT&Tag Library Prep Kit for Illumina® V2是针对Illumina®高通量测序平台研发的用于Multi-CUT&Tag实验的文库构建试剂盒，适用于100-100,000个细胞起始量的样本建库。Multi-CUT&Tag是研究蛋白与DNA互作的技术，相较于传统的CUT&Tag，该技术使用nanobody-Tn5（Anti-mouse Tn5和Anti-rabbit Tn5），可实现一份细胞，两种靶标的研究，同时，该技术实验中无需再添加二抗。经过细胞捕获、一抗孵育、转座酶孵育、转座酶激活、掺入DNA标准品、细胞裂解、磁珠回收gDNA、文库扩增和磁珠分选等步骤，靶蛋白结合的DNA片段最终转化为适用于Illumina®平台测序的文库。

本试剂盒包含两个独立模块：BOX-I和BOX-II。BOX-I包含结合细胞的ConA Beads、提取DNA 的DNA Extract Beads以及文库纯化的DNA Selection Beads，BOX-II包含细胞透化剂、抗体结合buffer、转座酶结合buffer、蛋白酶K以及后续文库扩增所需的所有试剂。此外，本试剂盒已在不同种类细胞（如293T、K562、CHO、ESC细胞等）中进行了验证，均具有良好的建库效率和建库产量。本试剂盒提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度上保证了文库的稳定性和重复性。

• 精简操作：无需二抗，只加一抗，减少实验影响因子。
• 一个细胞多个靶标：一次实验完成两个组蛋白修饰研究（组蛋白修饰任意组合）。
• CUT&Tag多靶标之间互相校正、互相检验，结果更真实。
• Spike in添加，进一步增加校正能力。

• 产品应用：蛋白质-DNA互作研究

1、多靶标CUT&Tag试剂盒与传统CUT&Tag试剂盒对比

差异：

传统流程的结合一抗、结合二抗，之后结合pA/G-Tn5；Multi-CUT&Tag流程结合一抗，结合anti rabbit（mouse）-Tn5

传统流程一次实验一种抗体；Multi-CUT&Tag一次实验两种抗体

传统流程使用pA/G-Tn5；Multi-CUT&Tag使用Anti-Mouse Tn5和Anti-Rabbit Tn5

2、同一细胞不同抗体的细胞表观图谱

同一细胞中，可实现不同染色质图谱研究，并且能很好的区分组蛋白异质性修饰和激活修饰，同时还能清楚的显示异质性修饰和激活修饰的共关联。

1）H3K4me1

将H3K4me1使用常规的CUT&Tag试剂盒以及使用nanobody-Tn5的试剂盒进行单靶标和多靶标建库并上机测序，结果如下：

图：H3K4me1使用常规CUT&Tag试剂盒和Multi-CUT&Tag试剂盒结果图

使用常规CUT&Tag试剂盒以及Multi-CUT&Tag试剂盒做单靶标实验时，结果差异不大，在某些位点上，Multi-CUT&Tag信号更明显。Multi-CUT&Tag做双靶标实验时，联合其他抗体（K3K27ac、H3K4me3、H3K36me3）均能拆分并且分析结果与单靶标结果一致。

2）H3K4me3

将H3K4me3使用常规的CUT&Tag试剂盒以及使用nanobody-Tn5的试剂盒进行单靶标和多靶标建库并上机测序，结果如下：

图：H3K4me3使用常规CUT&Tag试剂盒和Multi-CUT&Tag试剂盒结果图

使用常规CUT&Tag试剂盒以及Multi-CUT&Tag试剂盒做单靶标实验时，结果差异不大。Multi-CUT&Tag做双靶标实验时，联合其他抗体（K3K27me3、H3K4me1、H3K9me3、H3K9ac）均能拆分并且分析结果与单靶标结果一致。

3）H3K9me3

将H3K9me3使用常规的CUT&Tag试剂盒以及使用nanobody-Tn5的试剂盒进行单靶标和多靶标建库并上机测序，结果如下：

图：H3K9me3使用常规CUT&Tag试剂盒和Multi-CUT&Tag试剂盒结果图

使用常规CUT&Tag试剂盒以及Multi-CUT&Tag试剂盒做单靶标实验时，结果差异不大，在某些位点上，Multi-CUT&Tag信号更明显。Multi-CUT&Tag做双靶标实验时，联合其他抗体（K3K27ac、H3K4me3、H3K36me3）均能拆分并且分析结果与单靶标结果一致。

4）H3K27ac

将H3K27ac使用常规的CUT&Tag试剂盒以及使用nanobody-Tn5的试剂盒进行单靶标和多靶标建库并上机测序，结果如下：

图：H3K27ac使用常规CUT&Tag试剂盒和Multi-CUT&Tag试剂盒结果图

使用常规CUT&Tag试剂盒以及Multi-CUT&Tag试剂盒做单靶标实验时，结果差异不大，在某些位点上，Multi-CUT&Tag信号更明显。Multi-CUT&Tag做双靶标实验时，联合其他抗体（K3K27me3、H3K4me1、H3K9me3、H3K9ac）均能拆分并且分析结果与单靶标结果一致。

5）H3K27me3
将H3K27me3使用常规的CUT&Tag试剂盒以及使用nanobody-Tn5的试剂盒进行单靶标和多靶标建库并上机测序，结果如下：

图：H3K27me3使用常规CUT&Tag试剂盒和Multi-CUT&Tag试剂盒结果图

使用常规CUT&Tag试剂盒以及Multi-CUT&Tag试剂盒做单靶标实验时，结果差异不大。Multi-CUT&Tag做双靶标实验时，联合其他抗体（K3K27ac、H3K4me3、H3K27ac、H3K36me3）均能拆分并且分析结果与单靶标结果一致。

6）H3K9ac
将H3K9ac使用常规的CUT&Tag试剂盒以及使用nanobody-Tn5的试剂盒进行单靶标和多靶标建库并上机测序，结果如下：

图：H3K9ac使用常规CUT&Tag试剂盒和Multi-CUT&Tag试剂盒结果图

使用常规CUT&Tag试剂盒以及Multi-CUT&Tag试剂盒做单靶标实验时，结果差异不大，在某些位点上，Multi-CUT&Tag信号更明显。Multi-CUT&Tag做双靶标实验时，联合其他抗体（K3K27ac、H3K4me3、H3K36me3）均能拆分并且分析结果与单靶标结果一致。

BOX-I：2~8℃保存

BOX-II：-25~-15℃保存