Hieff NGS® Multi-CUT&Tag Library Prep Kit for Illumina® V2
多靶标CUT&Tag试剂盒(Nanobody-Tn5款)
一份样本,一次实验,多个靶标。节省时间和样本。信噪比高。
产品应用
蛋白质-DNA互作研究
产品优势
●精简操作:无需二抗,只加一抗,减少实验影响因子。
●一个细胞多个靶标:一次实验完成两个组蛋白修饰研究(组蛋白修饰任意组合)。
●CUT&Tag多靶标之间互相校正、互相检验,结果更真实。
●Spike in添加,进一步增加校正能力。
产品描述
Hieff NGS® Multi-CUT&Tag Library Prep Kit for Illumina® V2是针对Illumina®高通量测序平台研发的用于Multi-CUT&Tag实验的文库构建试剂盒,适用于100-100,000个细胞起始量的样本建库。Multi-CUT&Tag是研究蛋白与DNA互作的技术,相较于传统的CUT&Tag,该技术使用nanobody-Tn5(Anti-mouse Tn5和Anti-rabbit Tn5),可实现一份细胞,两种靶标的研究,同时,该技术实验中无需再添加二抗。经过细胞捕获、一抗孵育、转座酶孵育、转座酶激活、掺入DNA标准品、细胞裂解、磁珠回收gDNA、文库扩增和磁珠分选等步骤,靶蛋白结合的DNA片段最终转化为适用于Illumina®平台测序的文库。
本试剂盒包含两个独立模块:BOX-I和BOX-II。BOX-I包含结合细胞的ConA Beads、提取DNA 的DNA Extract Beads以及文库纯化的DNA Selection Beads,BOX-II包含细胞透化剂、抗体结合buffer、转座酶结合buffer、蛋白酶K以及后续文库扩增所需的所有试剂。此外,本试剂盒已在不同种类细胞(如293T、K562、CHO、ESC细胞等)中进行了验证,均具有良好的建库效率和建库产量。本试剂盒提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了文库的稳定性和重复性。
实验数据
图:同一细胞中不同的组蛋白修饰图谱
同一细胞中,可实现不同染色质图谱研究,并且能很好的区分组蛋白异质性修饰和激活修饰,同时还能清楚的显示异质性修饰和激活修饰的共关联。
组分信息
组分编号 |
组分名称 |
12592ES04 |
12592ES12 |
12592ES48 |
||
BOX-I |
12592-A |
⇔ |
ConA Beads |
40 μL |
120 μL |
480 μL |
12592-B |
⇔ |
DNA Extract Beads |
280 μL |
840 μL |
3.36 mL |
|
12592-C |
⇔ |
DNA Selection Beads |
400 μL |
1.2 mL |
4.8 mL |
|
BOX-II |
12592-D |
⇔ |
10 × Binding Buffer |
120 μL |
360 μL |
1.44 mL |
12592-E |
⇔ |
10 × Wash Buffer |
360 μL |
1.08 mL |
4.32 mL |
|
12592-F |
⇔ |
5% Digitonin |
12 μL |
36 μL |
144 μL |
|
12592-G |
⇔ |
50 × PB Buffer |
6 μL |
18 μL |
72 μL |
|
12592-H |
⇔ |
10 × Dig-300 Buffer |
400 μL |
1.2 mL |
4.8 mL |
|
12592-I |
⇔ |
Anti-mouse Tn5 |
8 μL |
24 μL |
96 μL |
|
12592-J |
⇔ |
Anti-rabbit Tn5 |
8 μL |
24 μL |
96 μL |
|
12592-K |
⇔ |
33 × Activating Buffer |
6 μL |
18 μL |
72 μL |
|
12592-L |
⇔ |
15 × Terminate Solution |
20 μL |
60 μL |
240 μL |
|
12592-M |
⇔ |
30 × Proteinase K |
10 μL |
30 μL |
120 μL |
|
12592-N |
⇔ |
DNA Spike-in Mix (5 ng/μL) |
4 μL |
12 μL |
48 μL |
|
12592-O |
⇔ |
2×HiFi Amplification Mix |
100 μL |
300 μL |
1.2 mL |
|
12592-P |
⇔ |
i5 Universal Primer |
8 μL |
/ |
/ |
|
12592-Q |
⇔ |
i7 Index Primer (T701) |
8 μL |
/ |
/ |
【注】:*12592ES12/48试剂盒不含Index Primer,需搭配Cat#12417进行完整建库;
*12592ES04中,index信息为i5 index GCCTTATG(对应mouse来源抗体数据)、AGGATATG(对应rabbit来源抗体数据)、i7 index TAAGGCGA(不同测序平台,i5端对应的序列可能需要反向,具体见参考第六部分:文库结构)。
***本试剂盒在实验前需自备蛋白酶抑制剂Cocktail(Yeasen Cat#20123ES)或其他等效产品
储存条件
BOX-I:2~8℃保存,BOX-II:-25~-15℃保存,有效期1年。