Nanobody-Tn5主要是将纳米抗体与Tn5转座酶进行融合，制备出可结合两种不同物种（小鼠和兔）一抗的anti-mouse Tn5和anti-rabbit Tn5。这两种nanobody-Tn5中包埋含不同index的接头序列时，Tn5切割染色质即可将接头插入到染色质中，通过不同的index来区分来源于mouse的一抗靶向区域还是来源于rabbit一抗靶向的区域。该产品为裸酶，需要自己组装接头序列。

 

组分信息

组分编号	组分名称	12595ES01	12595ES02	12595ES03
12595-A	Anti-mouse Tn5	10 μL	80 μL	100 μL
12595-B	Anti-rabbit Tn5	10 μL	80 μL	100 μL
12595-C	Assemble buffer	10 μL	80 μL	100 μL

 

储存条件

-85~-65℃保存，有效期1年。

 

使用说明

以高通量测序建库为例，在使用前，请务必仔细阅读使用说明。

1. 接头制备

1）Illumina平台参考引物名称及序列：

Primer A-1：5'-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACATAAGGCTCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3' Primer A-2：5'-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACATATCCTTCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3'

Primer A-3：5′-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3′

Primer B：5′-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG-3′
Primer C：5'-phos-CTGTCTCTTATACACATCT-3'

2）将Primer A、Primer B、Primer C溶解至200 μM。

3） 分别配制如下反应体系：

组分	反应1
Primer B（200 μM）	10 μL
Primer C（200 μM）	10 μL
total	20 μL

 

 

组分	反应2
Primer A-1 or A-2 or A-3（200 μM）	10 μL
Primer C（200 μM）	10 μL
total	20 μL

4）分别将反应1和反应2涡旋振荡充分混匀，并短暂离心使溶液回到管底。置于PCR仪内，进行如下反应程序：热盖105℃ On，94℃加热2 min。时间到后，停止反应程序，不要打开热盖，让PCR管在PCR仪器中自然冷却2 h，然后再于4℃中放置5 min。

5）反应结束后，将反应1和反应2等体积混合，混匀。命名为Adapter Mix，-25~-15℃保存。

2．转座子生成

1） 配置以下反应体系：

组分	体积（μL）
Anti-mouse Tn5 or Anti-rabbit Tn5	10
Adapter mix (50 μM)	0.5
Assemble Buffer	0.5

2）反应条件：使用移液器轻轻吹打充分混匀。置于25℃反应1 h（热盖关闭）。反应产物可直接应用于建库实验，或-25~-15℃保存。

 

注意事项

1. 转座酶对温度敏感，建议尽快完成接头包埋，生成的转座子可于-25~-15℃保存，有效期1年。

2. 本产品仅作科研用途。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

 

Ver.CN20231008