T4 RNA Ligase 1，即T4 RNA连接酶1，是一种ATP-依赖的可催化单链RNA、单链DNA或单核苷酸分子间或分子内5'-P末端与3'-OH末端之间形成磷酸二酯键的酶。T4 RNA Ligase 1可进行RNA之间的连接（效率最高），单链DNA与单链RNA之间的连接（效率不高），也可用于单链DNA之间的连接（效率很低）。适用于单链RNA分子的连接、NGS中miRNA文库构建的 5'端接头连接。

 

产品信息

货号	14651ES80/ 14651ES90
规格	1,000 U / 5,000 U
单位定义	在37℃条件下，30分钟内将1 nmol 的5 -[32P] rA16 转化成磷酸盐不溶物所需要的酶量定义为1 U。
来源	大肠杆菌表达的来源为T4嗜菌体的重组蛋白
推荐反应条件	10×T4 RL1 Reaction Buffer：500 mM Tris-HCl (pH 7.5 at 25℃)，100 mM MgCl2，20 mM DTT；最适37℃孵育。
失活条件	65℃加热15 min或煮沸2 min可使T4 RNA Ligase 1失活/加入终浓度50 mM EDTA pH 8.0可使T4 RNA Ligase 1反应终止。

 

组分信息

组分编号	组分名称	14651ES80	14651ES90
14651-A	T4 RNA Ligase 1 (10 U/μL)	100 μL	500 μL
14651-B	10×T4 RL1 Reaction Buffer	200 μL	1 mL

 

储存条件

-25~-15℃保存，有效期2年。

 

使用说明

1. 单链RNA的环化连接反应参考下表在冰浴中配制如下反应体系

组分	使用量（μL）
10×T4 RL1 Reaction Buffer	2
1 mM ATP	1
单链RNA (20 μM)	0.5
PEG-8000 (50%)	8
T4 RNA Ligase 1 (10 U/μL)	1
DEPC水	Up to 20

2. 单链RNA或DNA的分子间连接反应，参考下表在冰浴中配制如下反应体系

组分	使用量（μL）
10×T4 RL1 Reaction Buffer	2
10 mM ATP	2
单链RNA (10 μM)	2
单链DNA (10 μM)	2
PEG-8000 (50%)	8
T4 RNA Ligase 1	2
DEPC水	Up to 20

3. 连接反应：37℃孵育30 min*。

*如果发现效果欠佳可以适当延长连接反应时间或尝试25℃孵育2 h或16℃孵育16 h。

4. 终止反应：65℃孵育15 min或煮沸2 min，即可终止反应。

 

注意事项

1. 本品连接的底物无论是单链RNA还是单链DNA，都需要确保5'末端磷酸化或腺苷酰化，同时3'末端是羟基。

2. 可根据具体应用选择合适的操作方法，需准备额外的试剂，如RNase inhibitor、DEPC水等。

3. 根据连接反应的类型，推荐在反应体系中加入适量的PEG-8000。建议连接单链RNA或DNA的分之间连接反应体系中PEG-8000的终浓度为15%-25%，这样可以显著提高酶活性，同时不影响反应特性。

4. 本产品仅用作科研用途。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20230419