产品简介  

PNGase F (N-糖苷酶 F)是一种酰胺水解酶，经过和平空间站伊丽莎菌克隆，主要由脑膜炎脓杆菌等革兰氏阴性菌分泌。翌圣PNGase F, N-糖苷酶 F (100000 U/mL)在酵母中重组表达（比活性：100000 U/mL），可以裂解由天冬酰胺连接的高甘露糖、杂合和复杂的寡糖糖蛋白。PNGase F的切割位点为糖蛋白内侧N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨残基之间的酰胺键，同时将酶解后蛋白上的天冬氨酰转化为天冬氨酸。本产品带His标签，常应用于抗体及其相关蛋白完全去糖基化。

   另外，我司还提供Fast PNGase F, N-糖苷酶 F（快速版）（Cat#20406ES, 可以在数分钟内对抗体、免疫球蛋白、融合蛋白以及其他糖蛋白进行彻底和快速的去糖基化），PNGase F, N-糖苷酶 F (750000 U/mL)（Cat#20415ES，比活性：750000 U/mL），以及其他类型的糖苷酶，如Endo H糖苷内切酶H（Cat#20414ES），Endo S糖苷内切酶S（Cat#20413ES）。

 

产品信息

编号	组分名称	组分成分	20407ES01	20407ES02
20407-A	PNGase F	PNGase F	15000 U	75000 U
20407-B1	Buffer 1（10×）	5% SDS; 400 mM DTT	150 μL	750 μL
20407-B2	Buffer 2（10×）	200 mM Tris, PH 7.5	300 μL	1500 μL
20407-B3	10% NP-40	10% NP-40 in MilliQ-H2O	300 μL	1500 μL

 

产品性质

中文别名（Chinese synonym）	N-糖酰胺酶F；肽N-糖苷酶 F
英文别名（English synonym）	PNGase F
来源（Source）	酵母重组表达
分子量（Molecular weight）	36 kDa
比活性（Specific activity）	100000 U/mL
缓冲液组分（Buffer）	20 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM NaCl, 5 mM EDTA, 50% Glycerol
酶活定义（Unit Definition）	1个酶活力单位指在10 μL的反应体系中，37℃条件下1小时从10 μg变性RNase B中除去超过95%的碳水化合物所需要的酶量。

 

储存条件

-25~-15℃保存，有效期1年。

 

使用方法

1、变性条件下蛋白质去糖基化：

1）在水中加入1 μL Buffer 1和目标糖蛋白（1-20 μg），至终体积10 μL；

2）100℃温度下煮沸10 min使其变性，冰上冷却，离心10秒；

3. 加入2 μL的Buffer 2、2 μL的10％NP-40、6 μL去离子水，总反应体积20 μL；
4. 加入1-2 μL的PNGase F，轻轻混匀。在37℃孵育1-3 h。

2、非变性条件下蛋白质去糖基化：

1）在水中加入2 μL的Buffer 2和目标糖蛋白（1-20 μg）至最终体积为 20 μL。

2）加入 2~5 μL 的 PNGase F, 轻轻混匀。

3）37°C 孵育 4-24 h。

注意：在变性条件下大多数底物能够更好的去糖基化，在非变性条件下可能需要增加PNGase F的量和延长孵育时间。

 

注意事项

1. PNGase F建议搭配我司提供的配套缓冲液使用，按我司说明书建议的操作量配套缓冲液足够。如您由于使用体系造成配套缓冲液不足，可咨询当地销售进行购买（Cat#20407-B, 包含20407-B1（750 μL）、20407-B2（1500 μL）、20407-B3（1500 μL））

2. 本产品仅作科研用途。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20240614