随着糖蛋白质组学和抗体药研究的迅速发展，糖基化修饰也备受关注。细胞与细胞、细胞与病原体的接触主要是通过糖与蛋白质相互作用完成的，糖基化决定了糖复合物的粘附特性。在IgG中，Fc区Asn297处的保守N-连接糖对其活性也至关重要。此外，一些抗体还具有额外的N-糖链，与 Fc区 Asn297处的保守位点一起影响抗体的识别、半衰期和免疫反应。

蛋白质糖基化是一种复杂的翻译后修饰，涉及糖链在蛋白质特定位点的连接，依据糖链类型的差异，糖蛋白被分为N-连接糖蛋白、O-连接糖蛋白等；另外，蛋白质糖基化还受到宿主细胞类型和发酵条件（如培养基、pH值、温度等）波动的影响。因此，糖蛋白在糖基化模式上通常具有异质性，包括糖基化位点、糖基化程度以及糖链的具体结构，使得糖链分析和结构表征工作极具挑战，为了最大程度上获得糖链结构信息，目前糖链分析的主要策略是先把糖链从蛋白上游离下来，然后进行详细的分析表征。在此策略中，高效、准确、稳定的去糖基化方法至关重要。

酶促法是目前应用比较广泛的去糖基化方法。N-糖基化是多糖通过蛋白质上的天冬酰胺连接，寡糖链分为高甘露糖型、杂合型和双天线复合型。

对N-连接糖，常被使用的酶是PNGase F (N-糖苷酶F)、Endo H (糖苷内切酶H)、Endo S(糖苷内切酶S )等。

PNGase F (N-糖苷酶 F)是去除糖蛋白中几乎所有N-连接寡糖的最有效的酶促方法，可以裂解由天冬酰胺连接的高甘露糖、杂合和复合的寡糖糖蛋白，特异性除去N-连接糖。切割位点为：最内侧N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺残基之间的酰胺键，同时将酶解后蛋白上的天冬氨酰转化为天冬氨酸。当α1-6岩藻糖位于GlcNAc核心时，PNGase F也可以切割；只有当α1-3岩藻糖位于GlcNAc核心时（常见于植物和昆虫糖蛋白），PNGase F不能切割。

我司目前可提供Fast PNGase F, N-糖苷酶 F（快速版）（Cat#20406ES, 可以在数分钟内对抗体、免疫球蛋白、融合蛋白以及其他糖蛋白进行彻底和快速的去糖基化）、Fast PNGase F (Non-Reducing), N-糖苷酶 F（快速版，非还原）（Cat#20404ES, 可在保留二硫键的同时，在数分钟内对抗体、免疫球蛋白、融合蛋白以及其他糖蛋白进行彻底和快速的去糖基化），储存缓冲液中含甘油的PNGase F, N-糖苷酶 F (100000 U/mL)（Cat#20407ES）、PNGase F, N-糖苷酶 F (750000 U/mL)（Cat#20415ES），储存缓冲液中无甘油的PNGase F（Glycerol-free）, N-糖苷酶 F (无甘油，100000 U/mL)（Cat#20405ES）。

Endo H (糖苷内切酶H) 是一种重组糖苷酶，能够对N-糖蛋白中的高甘露糖和某些杂合型寡聚糖的壳二糖核心结构进行切割，去除糖蛋白中的N-连接高甘露糖。

我司目前可提供酵母重组表达的Endo H糖苷内切酶H（Cat#20414ES）。

Endo S(糖苷内切酶S )是一种高度特异性糖苷内切酶，可以从野生型IgG重链的壳二糖核心结构之间切除N-连接糖。糖苷内切酶S的活性对多肽没有严格的要求，因此X可以是蛋白质、肽、天门冬酰胺或游离聚糖。无论底物上有没有核心α1-6岩藻糖或平分型N-乙酰葡糖胺，糖苷内切酶S都有活性。但对于具有三、四个支链唾液酸化及去唾液酸化的聚糖，糖苷内切酶S没有活性。

Endo S2（糖苷内切酶 S2）是一种高度特异性糖苷内切酶，能够特异性切割IgG N-连接糖链中最内侧两个N-乙酰葡萄糖胺之间的糖苷键，对高甘露糖型、杂合型及双天线复合型糖链均具有高效水解作用。

表1.翌圣糖苷酶系列产品选购指南

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