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去糖基化酶助力糖蛋白和抗体糖型分析

背景介绍

随着糖蛋白质组学和抗体药研究的迅速发展,糖基化修饰也备受关注。细胞与细胞、细胞与病原体的接触主要是通过糖与蛋白质相互作用完成的,糖基化决定了糖复合物的粘附特性。在IgG中,Fc区Asn297处的保守N-连接糖对其活性也至关重要。此外,一些抗体还具有额外的N-糖链,与 Fc区 Asn297处的保守位点一起影响抗体的识别、半衰期和免疫反应。

蛋白质糖基化是一种复杂的翻译后修饰,涉及糖链在蛋白质特定位点的连接,依据糖链类型的差异,糖蛋白被分为N-连接糖蛋白、O-连接糖蛋白等;另外,蛋白质糖基化还受到宿主细胞类型和发酵条件(如培养基、pH值、温度等)波动的影响。因此,糖蛋白在糖基化模式上通常具有异质性,包括糖基化位点、糖基化程度以及糖链的具体结构,使得糖链分析和结构表征工作极具挑战,为了最大程度上获得糖链结构信息,目前糖链分析的主要策略是先把糖链从蛋白上游离下来,然后进行详细的分析表征。在此策略中,高效、准确、稳定的去糖基化方法至关重要。

 

 

酶促法是目前应用比较广泛的去糖基化方法。对N-连接糖,常被使用的酶是PNGase F (N-糖苷酶F)、Endo H (糖苷内切酶H)、Endo S(糖苷内切酶S )等。

 

产品介绍

01

PNGase F

PNGase F (N-糖苷酶 F)是去除糖蛋白中几乎所有N-连接寡糖的最有效的酶促方法,可以裂解由天冬酰胺连接的高甘露糖、杂合和复杂的寡糖糖蛋白,特异性除去N-连接糖。切割位点为:最内侧N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)和天冬酰胺残基之间的酰胺键,同时将酶解后蛋白上的天冬氨酰转化为天冬氨酸。当α1-6岩藻糖位于GlcNAc核心时,PNGase F也可以切割;只有当α1-3岩藻糖位于GlcNAc核心时(常见于植物和昆虫糖蛋白),PNGase F不能切割。

 

我司目前可提供Fast PNGase F, N-糖苷酶 F(快速版)(Cat#20406ES, 可以在数分钟内对抗体、免疫球蛋白、融合蛋白以及其他糖蛋白进行彻底和快速的去糖基化),储存缓冲液中含甘油的PNGase F, N-糖苷酶 F (100000 U/mL)(Cat#20407ES)、PNGase F, N-糖苷酶 F (750000 U/mL)(Cat#20415ES),储存缓冲液中无甘油的PNGase F(Glycerol-free), N-糖苷酶 F (无甘油,100000 U/mL)(Cat#20405ES)。

 

02

Endo H

Endo H (糖苷内切酶H) 是一种重组糖苷酶,能够对 N-糖蛋白中的高甘露糖和某些杂合型寡聚糖的壳二糖核心结构进行切割,去除糖蛋白中的 N-连接高甘露糖。

 

 

我司目前可提供酵母重组表达的Endo H糖苷内切酶H(Cat#20414ES)。

 

03

Endo S

Endo S(糖苷内切酶S )是一种高度特异性糖苷内切酶,可以从野生型IgG重链的壳二糖核心结构之间切除N-连接糖。糖苷内切酶S的活性对多肽没有严格的要求,因此X可以是蛋白质、肽、天门冬酰胺或游离聚糖。无论底物上有没有核心α1-6岩藻糖或平分型N-乙酰葡糖胺,糖苷内切酶S都有活性。但对于具有三、四个支链唾液酸化及去唾液酸化的聚糖,糖苷内切酶S没有活性。

 

 

我司目前可提供大肠杆菌重组表达的Endo S糖苷内切酶S(Cat#20413ES)。

 

表1.翌圣糖苷酶系列产品选购指南

产品货号

20406ES

20405ES

20407ES

20415ES

20414ES

20413ES

英文名称

Fast

PNGase F

PNGase F(Glycerol-free)

PNGase F

PNGase F

Endo H

Endo S

中文名称

  1. 糖苷酶F(快速版)

 N-糖苷酶 F

 (无甘油,100000 U/mL)

N-糖苷酶F

(100000 U/mL)

N-糖苷酶F

(750000 U/mL)

糖苷内切酶H

糖苷内切酶S

来源

酵母重组表达

酵母重组表达

酵母重组表达

酵母重组表达

酵母重组表达

大肠杆菌表达

比活

不适用

100000 U/mL

100000 U/mL)

750000 U/mL

1000000

U/mL

8000 U/mg

切割位点

几乎所有的N-连接糖

N-连接高甘露糖

 IgG 重链的壳二糖核心结构之间切除N-连接糖

酶切时间

10 min

1-3 h

1-3 h

1 h

应用

产物可直接进行下游的色谱或质谱分析

储存缓冲液中无甘油有助于在HPLC和质谱分析中获得最佳结果

储存缓冲液中含50%甘油,拥有最佳活性和稳定性,适用于糖组学和蛋白质组学进一步分析。

储存缓冲液中无甘油有助于在HPLC和质谱分析中获得最佳结果

糖组学、蛋白质组学

 

产品测试

01

Fast PNGase F的测试

 

02

Endo H的测试

 

03

Endo S的测试

 

产品信息

产品名称

产品编号

规格

目录价/元

Fast PNGase F, N-糖苷酶 F(快速版)

20406ES20/50

20 T/ 50 T

1895/4195

PNGase F, N-糖苷酶 F(100000 U/mL)

20407ES01/02

15000 U/75000 U

1125/4525

PNGase F, N-糖苷酶 F(750000 U/mL)

20415ES01/02

15000 U/75000 U

1225/4925

PNGase F(Glycerol-free),

N-糖苷酶 F(无甘油,100000 U/mL)

20405ES01/02

15000 U/75000 U

1125/4525

Endo H糖苷内切酶H

20414ES92/97

10000 U/50000 U

585/2195

Endo S糖苷内切酶S

20413ES80/90

1000 U/5×1000 U

500/2100

 

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2000 U/5000 U 

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400-6111-883