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产品描述
重组型TEV蛋白酶（rTEV）是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶，不仅保持天然TEV酶的功能活性，且在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。rTEV是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶，具有很强的位点特异性，严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。普遍应用的七氨基酸序列为：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。rTEV在pH 7.0，30℃时可达到最佳活性，但在pH 6.0-8.5和温度4-30℃的广泛范围内皆有活性（见表1），使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。另外rTEV切割后也能利用其N端的6×His标签，通过Ni-NTA树脂去除，以达到纯化目的蛋白的目的。
表1. 不同温度下rTEV酶切活性
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反应时间（h） |
不同温度下剪切活性（%） |
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|
4℃ |
16℃ |
21℃ |
30℃ |
|
|
1 |
34 |
58 |
56 |
70 |
|
2 |
58 |
80 |
78 |
90 |
|
3 |
71 |
99 |
99 |
99 |
|
3.5 |
84 |
99 |
99 |
99 |
产品性质
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来源（Source） |
大肠杆菌 |
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外观（Appearance） |
无色透明液体 |
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比活力（Specific Activity） |
5 U/μL |
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活性定义（Unit Definition） |
在1×rTEV Buffer（50 mM Tris，pH 8.0，0.1 mM EDTA，1 mM DTT）中，30℃反应1 h，剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。 |
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纯化（Purification） |
Ni柱亲和纯化 |
|
纯度（Purity） |
≥95%（by SDS-PAGE） |
产品组分
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编号 |
组分名称 |
产品货号/规格 |
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20403ES80/ （1000 U） |
20403ES92 （10×1000 U） |
20403ES10 （10 KU） |
20403ES50 （50 KU） |
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20403-A |
rTEV Protease（5 U/μL） |
200 μL |
10×200 μL |
2×1 mL |
10 mL |
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20403-B |
rTEV Buffer （10×） |
600 μL |
10×600 μL |
6 mL |
30 mL |
运输与保存方法
冰袋运输。rTEV Buffer于-20℃保存，一年稳定。rTEV Protease，-20℃保存，6个月稳定；-80℃长期保存，一年稳定。建议收到货或者第一次使用时分装各组分保存，避免反复冻融。
应用实例
1. 在EP管中配制如下反应体系。
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组分 |
用量 |
|
融合蛋白 |
40 μg |
|
rTEV Protease (5 U/μL) |
4 μL |
|
rTEV buffer（10×） |
10 μL |
2. 30℃孵育2h或4℃过夜。
注意事项
1. 影响天然TEV酶活性的常见因素：1）PMSF和AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM），Bestatin（1 mg/mL），EDTA（1 mM），Pestatin A（1 mM）以及E-64（3 mg/mL），而rTEV可兼容上述抑制剂；2）Zn离子浓度（>5 mM），同样对rTEV活性有抑制；3）与半胱氨酸反应的试剂，也是rTEV的潜在抑制剂。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3. 本产品仅作科研用途！
HB221013
