产品简介

PNGase F (N-糖苷酶 F)是一种酰胺水解酶，可以裂解由天冬酰胺连接的高甘露糖、杂合和复杂的寡糖糖蛋白，特异性除去N-连接糖，但常规PNGase F酶促反应释放抗体N-聚糖需要长达几小时，同时由于聚糖释放存在偏好性，不完全的去糖基化可能导致结果的偏差，所获得的聚糖分布不能代表治疗性抗体的正确组成。因此，尽量在最短时间内获得准确的 N-糖链糖谱对于抗体及抗体融合蛋白等生物治疗剂生产过程中糖基化监测至关重要。

翌圣Fast PNGase F，N-糖苷酶 F（快速版）是一种经过优化的重组试剂,可以在数分钟内对抗体、免疫球蛋白、融合蛋白以及其他糖蛋白进行彻底和快速的去糖基化。此酶能够迅速且无偏好性地去除所有的 N-糖链，并且可直接进行下游的色谱或质谱分析。翌圣Fast PNGase F，N-糖苷酶 F（快速版） 简化了实验流程，可在保证灵敏度和重复性的前提下减少实验时间。

   另外，我司还提供常规PNGase F，包括酵母重组表达的N-糖苷酶 F（Cat#20407ES，比活性：100000 U/mL），酵母重组表达的N-糖苷酶 F（Cat#20415ES，比活性：750000 U/mL），以及其他类型的糖苷酶，如内切糖苷酶H（Cat#20414ES），内切糖苷酶S（Cat#20413ES）。

 

产品信息

编号	组分名称	20406ES20	20406ES50
20406-A	Fast PNGase F	20 μL	50 μL
20406-B	Fast PNGase F Buffer （5×）	80 μL	200 μL

 

产品性质

中文别名（Chinese synonym）	N-糖酰胺酶F（快速版）；肽N-糖苷酶 F（快速版）
英文别名（English synonym）	Fast PNGase F
来源（Source）	酵母重组表达
缓冲液组分（Buffer）	20 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM NaCl, 5 mM EDTA

 

储存条件

2~8℃保存，有效期1年，严禁冻存。

 

使用方法

1、一步法蛋白质去糖基化：

1）将100 μg的抗体和H₂O混合至16 μL的总体积；

2）加入4 μL的Fast PNGase F Buffer (5x)，使总反应体积为20 μL；

3）加入1 μL的Fast PNGase F；

4) 在50°C孵育10分钟。

 

2、两步法蛋白质去糖基化：

备注：某些抗体（如Fab N-糖基化）需要预热步骤来进行高效的脱糖基化

1）将100 μg的抗体和H₂O混合至16 μL的总体积；

2）加入4 μL的Fast PNGase F Buffer (5x)，使总反应体积为20 μL；

3）在80°C孵育2分钟，冷却至室温；

4) 加入1 μL Fast PNGase F；

5) 在50°C孵育10分钟。

 

注意事项  

1. 为了获得最佳的热传导效果，可以使用0.2 mL PCR管或者1.5 mL 薄壁离心管。可以使用带有加热盖的热循环仪或者热金属浴进行孵育。
2. 推荐进行两步法酶切，可保证更高的酶切效率。
3. 抗体或抗体融合蛋白样品的储存体系要与Fast PNGase F活性兼容，由于SDS 抑制Fast PNGase F的酶活，储存体系不能含有 SDS；常用的稳定剂如 Tween、Triton X-100、NP-40、辛基葡糖苷和非去污剂磺基甜菜碱以及少量的有机溶剂均会影响最佳的快速去糖基化效率；
4. 75ºC 条件下处理 10 分钟可以灭活Fast PNGase F。
5. 本产品仅作科研用途。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20240605