杆状病毒-昆虫细胞（Baculovirus-Sf9）表达平台具有独特的优势，使其成为许多生物制品生产的有吸引力选择。在此情况下，建立合适的检测方法监测生产工艺，控制Sf9细胞等宿主昆虫细胞残留核酸限度，以确保产品的安全性和质量已经成为监管机构和行业内关注的重点。

严格的纯化工艺可以去除一部分宿主细胞DNA（HCD）等残留杂质成分，但产品中仍然可能会有HCD残留，这些残留的外源宿主细胞DNA会引发潜在的安全问题（如潜在致瘤性、传染性，甚至增加免疫源性或导致突变），所以HCD检测项目是生物制品生产工艺中重要的质量检测指标之一。各国的药典法规也相继出台了针对生物制品中外源宿主DNA残留量限度的规定。

《中国药典》2020年版三部规定，以细胞基质生产生物制剂外源宿主细胞DNA残留量不能超过100pg/剂。《欧洲药典》（EP10.0）通则规定的生物制品残留DNA限度大多为不超过10ng/剂。

美国食品药品监督管理局（FDA）发布的指导原则中指出生物制品宿主细胞DNA残留限度不得超过100pg/剂，对于大剂量的生物制品（如单克隆抗体），根据其残留DNA来源及给药途径，DNA残留量可放宽至10ng/剂。

现行各国药典中生物制品残留DNA检测方法主要有4种：杂交法、阈值法、荧光染料法和定量PCR法等。其中，qPCR法具有极高的灵敏度、序列特异性和准确性，可为生物制药工业在工艺研究和成品质量控制方面提供可靠的检测手段，现也已成为各生物制品企业首选检测方法。

针对上述情况，翌圣生物自主研发了Sf9和杆状病毒（AcNPV）DNA残留检测试剂盒，基于探针法荧光定量PCR原理，采用多重qPCR方法分别检测Sf9和杆状病毒（AcNPV）残留DNA，Sf9定量限可达1fg/μL，杆状病毒（AcNPV）定量限可达7copies/μL。还研发了与之配套使用的宿主细胞残留DNA样本前处理试剂盒，以及配套的自动化核酸提取仪器。

 

产品资质：

符合法规：按照EP2.6.7、JP G3和USP 63药典要求验证，符合国际权威机构的标准；

配合审计：产品生产符合ISO13485质量体系标准，有完善的审计文件；

保障品质：试剂盒所需酶原料全自产，且已产业化，供货稳定；

技术经验积累：TaqMan法有技术沉淀，使得Kit灵敏度高；

专注产品性能：Taq酶抗体库，双封闭抗体提高了Kit特异性、稳定性等。

 

产品特点：

抗干扰性：针对复杂基质，样本加标回收率至少能达到70-130%；

灵敏度高：定量下限(LLOQ)分别为Sf9 1fg/μL，AcNPV 7copies/μL；

精密度高：批内重复性高CV＜10%，批间差异小即中间精密度CV＜15%；

专属性强：特异性检测Sf9和AcNPV残留DNA，不受其他外源基因组DNA干扰；

防干扰强：引入内部质控(IC)，可排除样本干扰、反应配制异常等因素，有效避免假阴性。

验证完善：参考ICH Q2（R2）分析方法验证指导原则，可提供完善的验证报告。

 

验证内容：

Sf9和AcNPV检测验证项目		参考标准or要求	备注
1、试剂盒标准品（参考品）		Sf9细胞基因组DNA和含杆状病毒(AcNPV)基因序列的质粒DNA
2、线性范围	标曲范围	参考说明书或实际情况（Sf9 3fg/μL~300pg/μL，AcNPV 2.12×101～2.12×106copies/μL）
	R2	≥0.98（P.s.本试剂盒≥0.99）	药典要求
	斜率	-3.1~-3.8（P.s.本试剂盒-3.1~-3.6）	药典要求
	扩增效率	90%~110%（P.s.对应的斜率-3.1~-3.6，行业内要求）
3、准确性	回收率	50%~150%（P.s.本试剂盒70~130%）	药典要求
4、精密度	重复性	CV＜10%
	中间精密度	CV＜15%
5、专属性		不受其他来源基因组DNA的干扰
6、灵敏度	定量限	Sf9 1fg/μL，AcNPV 7copies/μL
7、耐用性	仪器适用性	Thermo：ABI 7500、ABI QuantStudio5； Bio-Rad：CFX96 Optic Module； 上海宏石：SLAN-96S； 博日：LineGene9600.
8、稳定性	加速稳定性	37℃稳定14天，2~8℃稳定30天
	反复冻融	≥10次
	有效期	-25~-15℃保存2年
9、空白限	无模板对照（NTC）	重复96次qPCR扩增曲线未起峰
	阴性抽提对照（NCS）	重复48次qPCR扩增曲线未起峰

 

产品信息：

产品	货号	品名	规格
样本前处理 试剂盒	18461ES	MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit 磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒（瓶装）	25T/100T
	18467ES	MolPure® Mag48 Sample Preparation Kit FN 磁珠法48孔样本前处理试剂盒FN（预封装)	3×16T/ 6×16T
核酸提取仪器	80511ES	48通道自动化核酸提取仪	48通量
Sf9和AcNPV残留DNA 检测试剂盒	41330ES	Sf9&AcNPV DNA Residue Detection Kit Sf9和杆状病毒（AcNPV）DNA残留检测试剂盒	50T/100T