MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column,1ML MBP标签蛋白纯化预装柱,1 ML

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产品说明书

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产品简介

 

MBPSep Dextrin Agarose Resin 是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白(MBP)标签蛋白的亲和层析介质,MBP可促进连接蛋白的正确折叠,增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF可以一步纯化MBP融合蛋白,结合的融合蛋白可以用10 mM麦芽糖进行温和洗脱,保护了目的蛋白的活性,MBP融合部分后续可用位点特异性蛋白酶切除。此外,MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质,具有更高的物理化学特性,可以耐受更高的压力,在相对较高的流速下,实现对目的蛋白的纯化,更适于工业大规模蛋白的纯化。

MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 1 mL是装填了MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF的一种中压预装柱,规格1 mL,预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如ÄKTA等,方便客户操作。

 

产品信息

 

货号

20516ES03/20516ES08

规格

1 mL / 5×1 mL

 

产品性质

 

基质(Matrix)

高度交联的6%琼脂糖微球

配体(Ligand)

糊精

粒径(Bead size)

45-165 µm

载量(Capacity)

>10 mg MBP蛋白80 kDa)/mL基质

最大压力(PressureMax

0.3 MPa,3 bar

pH稳定范围(pH range)

3-12

储存缓冲液(Buffer)

20%乙醇PBS

 

储存条件

 

2~8℃保存,有效期2年。

 

需准备试剂

所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤除菌。

平衡/洗杂缓冲20 mM Tris-HCl, 200 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH7.4

洗脱缓冲20 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM 麦芽糖, pH7.4

【注】平衡/洗杂缓冲液洗脱缓冲液中可加入1 mM DTT  10 mM β-巯基乙醇

使用说明

【注】样品在上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤,减少杂质以防阻塞柱子。

1. 样品纯化(以Akta为例)

1)准备:将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子,将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口,将预装柱接到色谱系统中,并旋紧。

2)清洗:3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。

3)平衡:5倍柱体积的平衡Buffer平衡层析柱,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。

4上样:将样品加到平衡好的层析柱中,推荐流速1 mL/min,保证目的蛋白与树脂充分接触,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,待检测。

注:样品的粘度增加使得即使上样体积很少,也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。

5洗杂:用10-15倍柱体积的洗杂buffer进行清洗,直到紫外吸收达到一个稳定的基线,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液,待检测。

6洗脱:用洗脱Buffer采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中,通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积或更多,来分离不同结合强度的蛋白质。

7清洗与保存:依次使用3倍柱体积的平衡Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%乙醇中,置于2-8℃保存,防止填料被细菌污染。

2. SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。

3.填料清洗

MBP标签蛋白纯化产品可以重复使用而无需再生,但随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集,会造成流速和结合载量性能下降,可按照下面方法对填料进行清洗。

1)3倍柱体积的去离子水;

2)3倍柱体积的0.1%SDS或0.1 M NaOH溶液;

3)3倍柱体积去离子水;

4)填料清洗后保存在等体积的20%乙醇中置于2-8保存

 

注意事项

 

  1. 请勿冷冻保存本产品。
  2. 所有操作过程中,样本需要在4℃或冰上操作。
  3. 本产品仅作科研用途
  4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

附表 问题及解决方案

问题

可能原因

推荐解决方案

柱子反压过高

填料被堵塞

清洗树脂

裂解液中含有微小的固体颗粒,建议上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤,或离心去除

洗脱组分中无目的蛋白

目的蛋白未表达

优化实验方案,确保目的蛋白表达

样品或缓冲液中存在一些干扰因素如非离子去污剂

样品透析或用平衡buffer稀释

细胞产生大量的淀粉酶影响结合力

培养基中添加葡萄糖,抑制淀粉酶的表达

融合蛋白使麦芽糖结合位点阻塞或扭曲影响了目的蛋白的结合力

更换载体

柱子结合时间太短

将样品与树脂振荡孵育4℃2h或更长时间 

洗脱样品较杂

目的蛋白降解

加一些蛋白酶抑制剂,如PMSF、EDTA等

平衡/洗杂不充分

增加平衡液体积,确保树脂充分平衡/洗杂。

 

 

 

Ver.CN20231117

 

 

400-6111-883