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警惕非洲猪瘟，翌圣提供一站式解决方案

据世界动物卫生组织（WOAH）消息，2023年2月13日，我国香港特别行政区渔农自然护理署向WOAH通报称，香港地区发生一起非洲猪瘟疫情。另外据Mysteel统计，国内也时有非洲猪瘟疫情，全国主要20个省份非瘟情况分为影响一般、影响轻微、基本无影响区。其中山西、河北、山东、辽宁属于影响一般区域，两湖两广、江西、福建、江苏、浙江8个省属于基本无影响区，黑龙江、吉林、河南、安徽、云南、四川、重庆、贵州8省属于影响轻微区。
 
进入春季，气温降低、昼夜温差大，空气干燥，非洲猪瘟病毒在环境中更易存活，猪只健康容易受影响，非洲猪瘟进入高发期。养殖场户应从消毒灭源、控制传播、疫病监测和检测、提高猪只健康水平等方面强化防控措施，降低非洲猪瘟发生风险。 
 
翌圣生物作为生命科学工具供应商，长期为IVD企业提供高品质、高性价比的原料，积极协助应对非洲猪瘟疫情，可为客户提供非洲猪瘟防控通用及定制化解决方案。
 

 非洲猪瘟核酸检测流程

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ASFV检测解决方案

方案一：

全自动核酸提取+高灵敏全预混qPCR

全自动、操作简便、省时稳定

Auto-Pure 32A automated nucleic acid extraction system （Cat#80501）

  • 产品特点：

全自动提取、简便省时、提取效率高、样本通量可变、兼容性广、防污染

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图1. 32A全自动核酸提取仪（Cat#80501）

 

MolPure® Mag32 Swab Viral DNA/RNA Kit FA（Cat#18301）

  • 产品特点：提取效率高、重复性好、试剂形式多样化、安全无毒

 
 

Hieff Unicon® Universal TaqMan Multiplex qPCR Master Mix（UDG plus）（Cat#13891）

  • 产品特点：超强全预混稳定性、高灵敏度、支持快速程序、多平台多体系适用、UDG防污染体系

 

  • 数据展示：

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图2.Yeasen（Cat#13891）全预混热稳定性及冻融稳定性验证

 

将Yeasen qPCR预混液（Cat#13891）配置成含引物探针的全预混液，在37℃放置16天以及冻融10次后，ASFV阳性样本稀释10倍以及最低检出限对应的稀释1000倍作为模板进行扩增，发现Ct值和荧光值无显著变化，性能稳定。

 

方案二：

核酸释放剂+耐抑制qPCR试剂

免提取直扩qPCR，操作更便捷

Nucleic Acid Release Reagent（Cat#13720）

  • 产品特点：10min快速裂解、可室温运输与保存

 
 

Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix（Cat#11211）

  • 产品特点：血液杂质耐受性强、超高灵敏度、超强存储稳定性

 

 

  • 数据展示：

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图3.Yeasen（Cat#11211）及各品牌同类型试剂血液杂质耐受能力

 

选择与血液保存相关的物质（EDTA、柠檬酸钠）作为杂质背景，使用Yeasen qPCR预混液（Cat#11211）及各品牌同类型试剂对模板进行扩增。结果发现，与同类产品相比， Yeasen qPCR预混液具有更强的杂质耐受能力。

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图4.Yeasen（Cat#11211）热稳定性验证

 

使用ASFV/ACT双质粒体系，在37℃下分别放置7天和14天后，Ct值和荧光值无显著变化，性能稳定。
 

方案三：等温扩增

简便、快速、高效

RT-LAMP Dye Assay Kit（UDGplus）（Cat#13762ES）

  • 产品特点：操作简便、灵敏度高、特异性好、试剂耐受性强、超强稳定性

 

  • 数据展示：

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图5.Yeasen（Cat#13762）灵敏度验证
 
用Yeasen RT-LAMP试剂（Cat#13762）测试50 copies/T的RNA病毒，测试结果表明在15min内，检出率达100%；检测48孔NTC，测试结果不起峰，特异性良好。
 

Hieff® Bst Plus DNA Polymerase（Cat#14402）

  • 产品特点：反应快速、链置换活性强、灵敏度高、高dUTP耐受性

 

  • 数据展示：

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图6. 高dUTP耐受性验证

 

使用翌圣Hieff® Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL)进行LAMP反应，扩增DNA病毒 (50 copies/T)。在推荐反应方案中引入dUTP/UDG酶防污染系统，使用dUTP替换dTTP。对比全U（35 mM）替换（红色扩增曲线）与T：U = 1：1（蓝色扩增曲线）的扩增结果发现，在反应体系中添加dUTP对该酶的灵敏度及扩增效率无影响，该酶具有较高的dUTP耐受性。

 

 

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ASFV检测耗材

 

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ASFV检测实验室污染防控

DNA/RNA Remover 核酸气溶胶污染清除剂 （Cat#19702）

  • 产品特点：

方便有效：即用型喷雾剂，能去除绝大多数物体表面的核酸（DNA/RNA）污染。
适用性广：适用于PCR实验室、PCR设备及耗材等领域。
稳定性好：常温保存1年。
 

  • 数据展示：

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图7.不同物体表面的清除前VS清除后的效果对比
 
在EP管（塑料）、玻璃、实验台面、金属等地方模拟核酸污染，然后使用核酸清除剂进行清洁操作。清洁前、后分别进行qPCR反应，得到qPCR扩增曲线和对应的Ct值，显示核酸清除剂处理不同物体表面均可将核酸完全清除。
 

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