Hifair^® V Multiplex One Step RT-PCR Kit是以RNA为模板进行多重PCR反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和PCR在同一反应管中进行，简化了实验操作。

本试剂盒利用耐热Hifair^® V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA，并利用UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的MP Buffer、Enzymes Mix等，缓冲液中已含有Mg²⁺和dNTP等，并添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重PCR反应扩增效率的因子，能够保证引物扩增效率的同时，进行多达八重的反应。

 

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
		13089ES50 （50T）	13089ES60 （100T）
13089-A	2×Hifair® V MP Buffer	500 μL	1 mL
13089-B	Hifair® V Enzyme Mix	75 μL	150 μL
13089-C	RNase Free H2O	500 μL	1 mL

【注】1) 2×Hifair^® V MP Buffer为Multiplex One Step RT-PCR Kit的简写。本组分含有dNTP和Mg²⁺和扩增所需的离子。

2. Hifair^® V Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair^® V Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase。

 

运输与保存方式

冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。

 

注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作

反应体系（以20 μL为例）

组分	体积（μL）	终浓度
2×Hifair® V MP Buffer	10	1×
Hifair® V Enzyme Mix	1.5	-
Primer Mix	x	0.1 μM -0.5 μM
模板 RNA	1 ng-100 ng	-
RNase Free H2O	to 20	-

【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

1. 引物浓度：Primer Mix中包含多对引物，通常每条引物终浓度为0.2 μM，也可以根据情况在0.1-0.5 μM间进行调整。

b) 反应体系：推荐使用20 μL以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

c) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

 

标准扩增程序

	反应阶段	温度	时间	循环数
1	逆转录	50℃a	15 min	1
2	预变性	95℃	5 min	1
3	扩增反应	95℃	15 sec	35
		60℃b	5 min

【注】1）退火/延伸温度可根据实验要求适当调整

2.  退火/延伸的时间可根据扩增长度进行调整，扩增速度1 kb/min  

 

HB200913