Hifair® V Multiplex One Step RT-PCR Kit 一步法多重反转PCR试剂盒

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产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

Hifair® V Multiplex One Step RT-PCR Kit是以RNA为模板进行多重PCR反应的试剂盒。在实验的过程中,逆转录和PCR在同一反应管中进行,简化了实验操作。

本试剂盒利用耐热Hifair® V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA,并利用UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的MP Buffer、Enzymes Mix等,缓冲液中已含有Mg2+dNTP等,并添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重PCR反应扩增效率的因子,能够保证引物扩增效率的同时,进行多达八重的反应。

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

13089ES50

(50T)

13089ES60

100T)

13089-A

2×Hifair® V MP Buffer

500 μL

1 mL

13089-B

Hifair® V Enzyme Mix

75 μL

150 μL

13089-C

RNase Free H2O

500 μL

1 mL

【注】1) 2×Hifair® V MP Buffer为Multiplex One Step RT-PCR Kit的简写。本组分含有dNTP和Mg2+和扩增所需的离子。

  1. Hifair® V Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair® V Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase。

 

运输与保存方式

冰袋运输。-20保存,有效期1年。

 

注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作

反应体系(以20 μL为例)

组分

体积(μL)

终浓度

2×Hifair® V MP Buffer

10

Hifair® V Enzyme Mix

1.5

-

Primer Mix

x

0.1 μM -0.5 μM

模板 RNA

1 ng-100 ng

-

RNase Free H2O

to 20

-

】:使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。

  1. 引物浓度:Primer Mix中包含多对引物,通常每条引物终浓度为0.2 μM,也可以根据情况在0.1-0.5 μM间进行调整。

b) 反应体系:推荐使用20 μL以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

c) 体系配制:请于超净工作台内配制,并使用无核酸酶残留的枪头、反应管;推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

 

标准扩增程序

 

反应阶段

温度

时间

循环数

1

逆转录

50℃a

15 min

1

2

预变性

95℃

5 min

1

3

扩增反应

95℃

15 sec

35

60℃b

5 min

【注】1)退火/延伸温度可根据实验要求适当调整

  1.  退火/延伸的时间可根据扩增长度进行调整,扩增速度1 kb/min  

 

HB200913

400-6111-883