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COA
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Hieff Unicon® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit (with MgCl2) 是以 RNA 为模板进行多重定量 PCR 反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量 PCR 在同一反应管中进行，简化了实验操作，降低了污染的风险。独特的 Buffer 和酶的设计，可用于一步法 RT-qPCR 冻干反应体系的配制和产品设计。
本试剂盒利用耐热Hifair® V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA，并利用UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的冻干 Buffer，Enzymes Mix 等，并添加了有效抑制非特异性 PCR 扩增的因子和提升多重 qPCR 反应扩增效率的因子，能够在保证引物扩增效率的同时，进行多重荧光定量扩增反应。
本试剂盒酶 mix 中匹配冻干保护剂，可以直接用于冻干。
产品信息
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货号 |
13775ES60 / 13775ES80 / 13775ES92 |
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规格 |
100 T / 1000 T / 10000 T |
组分信息
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组分编号 |
组分名称 |
13775ES60 (100 T) |
13775ES80 (1000 T) |
13775ES92 (10000 T) |
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13775-A |
4×Hifair® V Lyo-Buffer |
600 μL |
6 mL |
60 mL |
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13775-B |
MgCl2 (25 mM) |
500 μL |
5 mL |
50 mL |
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13775-C |
10×Hifair® V Lyo-Enzyme Mix |
240 μL |
2.4 mL |
24 mL |
【注】1. 4×Hifair® V Lyo-Buffer 为 Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer 的简写。
2. 10×Hifair® V Lyo-Enzyme Mix 主要包含有耐热 Hifair® V Reverse Transcriptase 和 UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase。
储存条件
-25~-15℃保存，有效期1年。
使用说明
- 反应体系（以25 μL为例）
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组分 |
体积（μL） |
终浓度 |
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4×Hifair® V Lyo-Buffer |
6 |
1× |
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10×Hifair® V Lyo-Enzyme Mix |
2.4 |
- |
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MgCl2 (25 mM) |
3 |
- |
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Primer Mix (10 μM) |
各0.4 |
0.16 μM |
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Probe Mix (10 μM) |
各0.2 |
0.08 μM |
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模板RNA |
1-5 |
- |
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RNase Free H2O |
to 25 |
- |
【注】使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。
- 引物浓度：Primer Mix 中包含多对引物，通常每条引物终浓度可以根据情况在 0.1-1.0 μM 间进行调整。
- 探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。。
3. 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。
4. 反应体系：推荐使用25 - 50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
5. 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头；避免交叉污染和气溶胶污染。
- 参考扩增程序
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循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
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逆转录 |
50℃a |
10 min |
1 |
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预变性 |
95℃ |
5 min |
1 |
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扩增反应 |
95℃ |
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45 |
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60℃b |
30 secc |
【注】a. 逆转录：42℃或者55℃均可，时间 10-15 min。
b. 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。
c. 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。
- 适用机型
ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex；
Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™；
Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™；
Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000；
Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96；
Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR
注意事项
1. 实验过程中请使用RNase free耗材。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20230731
