推荐应用
Hifair® Lyo-Ready I Multiplex OneStep RT-qPCR Kit(UDG plus)是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中,逆转录和定量PCR在同一反应管中进行,简化了实验操作,降低了污染的风险。独特的Buffer和酶的设计,可用于一步法RT-qPCR冻干反应体系的配制和产品设计。
本试剂盒利用耐热Hifair® V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA,并利用UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的冻干Buffer,Enzymes Mix等,并添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子,能够在保证引物扩增效率的同时,进行多重荧光定量扩增反应。本试剂盒中匹配了冻干保护剂,可以用于冻干。
l 冻干后依然保持酶活性完整,性能和液体试剂一样
l 采用基因改造的抗体法热启动 Taq 酶,灵敏度高,5 copies/T可稳定检出
l 含引物探针的冻干球,在50℃热加速一个月,性能不受影响
l 快速程序下性能不受影响,30min即可出结果
l 引入了dUTP/UDG防污染系统,可有效防止气溶胶污染
l 含冻干保护剂,可直接进行冻干,也可作为液体试剂直接使用
1、冻干前后性能一致
使用以下条件测试16645液体试剂和其冻干球的性能,结果显示:16645冻干后复溶的试剂性能依旧稳定。
| 仪器 | 7500 | 液体体系(红色曲线) | 25 μL总体系,其中模板5uL |
| 模板 | 转录RNA模板 | 模板浓度 | 105、104、103 copies/uL |
| 冻干体系(蓝色曲线) | 20uL体系冻干(含引物探针),取1颗冻干球加20uL无酶水,5uL模板。 | ||
| 扩增程序 | 50°C 2 min;95°C 30 sec;40 cycles (95°C 5sec;60°C 10 sec) | ||

图1. 16645液体试剂和其冻干球性能测试
2、稳定性测试
将含HPIV引物探针的16645体系按说明书上冻干工艺和条件进行冻干,冻干球在50℃条件下加热一个月,与同批次刚出箱冻干球相比,扩增曲线峰形、Ct值、低浓度检出率(1copy/uL,20个重复,检出率均为100%)均没有差异,冻干球稳定性好。
| 仪器 | 7500 | 体系 | 25 μL |
| 模板 | 转录RNA模板 | 模板浓度 | 105、104、103 copies/uL及1 copy/uL |
| 对照组(红色曲线) | 20uL体系冻干(含引物探针),立即取1颗冻干球加20uL无酶水,5uL模板。 | ||
| 实验组(蓝色曲线) | 20uL体系冻干(含引物探针),冻干球于50℃放置30天,取1颗冻干球加20uL无酶水,5uL模板。 | ||
| 程序 | 50°C 2 min;95°C 30 sec;40 cycles (95°C 5sec;60°C 10 sec) | ||

图2. 16645冻干球性能及稳定性测试
-25~-15℃保存,有效期1年。
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