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本产品是一管式探针法RT-qPCR专用预混液,适用于以RNA为模板的单重或多重定量PCR检测。在实验的过程中,逆转录和定量PCR在同一反应管中进行,简化了实验操作,降低了污染的风险。
为了满足客户对高效、便捷的需求,全预混试剂逐步替代分步法试剂而成为主流。本试剂盒采用了新一代抗体法热启动酶、一步法专用逆转录酶和针对一管式全预混RT-qPCR 的特殊缓冲体系,支持提前将引物探针与试剂预混成一管长期保存,检测人员在使用时直接添加模板RNA即可上机检测,可很大程度上解决体系配制加样步骤繁琐、易出错、试剂损耗大、大量样本检测效率低等问题。
此外,该产品添加了dUTP/UDG 系统,可在室温下发挥作用,有效防止气溶胶污染。
针对全预混试剂对性能和稳定性的严苛要求,翌圣生物依托 ZymeEditor™双向分子酶理性设计和定向进化平台,以及高性能单克隆抗体研发平台,筛选出的高封闭率双封闭抗体结合不同表位,确保 Taq DNA 聚合酶的聚合和切割活性被彻底封闭,且又能在反应时迅速失活;同时分子诊断试剂关键原料研发平台对反应体系进行优化,降低体系引物探针之间的二级结构产生概率,优化低值区曲线形态,尽可能提高试剂检出率,经过大量体系测试、调整、验证,正式推出这款通用性强、可实现引探提前预混后37℃加速5天性能不发生变化、30min内出结果的RNA全预混试剂。
1、全预混试剂与非全预混试剂对比测试
实验条件:
| 货号 | 16913与16630 | 检测体系 | 人呼吸道、人源基因、动物疫病体系,25uL |
| 模板 | 假病毒模板 | 模板浓度 | 300 copies/uL |
| 程序 | 50℃ 4min;95℃ 30s;45 Cycles (95℃ 5s,60℃ 15s) | ||
| 结果 | 扩增各种来源的靶标,两者性能无差异,说明全预混试剂在简化产品形式的基础上,并未牺牲性能,全预混体系仍能做到性能好、通用性强。 | ||

图1. 16913ES全预混体系与16630非全预混体系扩增性能比较
2、全预混试剂稳定性测试
实验条件:
| 货号 | 16913ES | 检测体系 | 动物疫病体系,25uL |
| 模板 | 疫苗模板提取的核酸 | 模板浓度 | / |
| 程序 | 50℃ 4min;95℃ 30s;45 Cycles (95℃ 5s,60℃ 15s) | ||
| 结果 | 试剂与动物疫病多重引探预混,在37℃加速5天,性能不受影响,说明16913ES全预混体系稳定性强。 | ||

图2. 16913ES全预混体系37℃热加速5天后稳定性测试
3、全预混试剂低浓度模板检出率测试
实验条件:
| 货号 | 16913ES | 检测体系 | 人呼吸道体系,25uL |
| 模板 | HPIV、RSV假病毒 | 模板浓度 | 1 copy/uL |
| 程序 | 50℃ 4min;95℃ 30s;42 Cycles (95℃ 5s,60℃ 15s) | ||
| 结果 | 16913ES预混呼吸道多重引探后在37℃加速5天,与-20℃保存、现配现用的试剂相比,扩增曲线峰形、荧光值、Ct值基本没有变化,检出率一致,说明16913ES全预混体系稳定性强、灵敏度高。 | ||

图3. 16913ES全预混体系37℃热加速后灵敏度测试
-25~-15℃保存,有效期1年。
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