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产品简介
Hifair® Lyo Multiplex One Step RT-qPCR Kit是以 RNA 为模板进行多重定量 PCR 反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量 PCR 在同一反应管中进行，简化了实验操作，降低了污染的风险。独特的 Buffer和酶的设计，可用于一步法 RT-qPCR 冻干反应体系的配制和产品设计。
本试剂盒利用耐热 Hifair® V Reverse Transcriptase 高效合成第一链 cDNA，并利用 UNICON® HotStart Taq DNA
Polymerase 进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的冻干 Buffer，Enzymes Mix 等，并添加了有效抑制非特异性 PCR 扩
增的因子和提升多重 qPCR 反应扩增效率的因子，能够在保证引物扩增效率的同时，进行多重荧光定量扩增反应。
本试剂盒中匹配了冻干保护剂，可以用于冻干。
产品信息
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货号 |
11831ES60 / 11831ES80 / 11831ES92 |
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规格 |
100 T / 1000 T / 10000 T |
组分信息
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组分编号 |
组分名称 |
11831ES60(100 T) |
11831ES80(1000 T) |
11831ES92(10000 T) |
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11831-A |
4×Hifair® Lyo-Buffer |
600 μL |
6 mL |
60 mL |
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11831-B |
Hifair® Lyo-Enzyme Mix |
100 μL |
1 mL |
10 mL |
|
11831-C |
冻干保护剂 |
800 μL |
8 mL |
80 mL |
【注】1) 4×Hifair® Lyo-Buffer 为 Lyo Multiplex One Step RT-qPCR kit 的简写。
2) Hifair® Lyo-Enzyme Mix 主要包含有耐热 Hifair® V Reverse Transcriptase 和 UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase。
运输条件
1. 保存方式：
Part 1： 11831-A【 4×Hifair® Lyo-Buffer 】、11831-C【 冻干保护剂 】，-25~-15℃ 保存，有效期 1 年。
Part 2： 11831-B【 Hifair® Lyo-Enzyme Mix 】，2~8℃ 保存，有效期 6 个月。
- 运输方式：冰袋运输。
使用方法
- 反应体系（以25uL体系为例）
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组分 |
体积（μL） |
终浓度 |
|
4×Hifair® Lyo-Buffer |
6 |
1x |
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Hifair® Lyo-Enzyme Mix |
1 |
- |
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冻干保护剂 |
8 |
- |
|
Primer Mix(10μM) |
1 |
0.1-1 uM |
|
Probe Mix(10μM) |
0.5 |
0.05-0.5 uM |
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模板RNA |
5 |
- |
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DEPC H20 |
up to 25 |
- |
- 参考扩增程序
1）常规扩增程序
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循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
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逆转录 |
50℃a |
10 min |
1 |
|
预变性 |
95℃ |
5 min |
1 |
|
扩增反应 |
95℃ |
|
45 |
|
60℃b |
30 secc |
2）快速扩增程序
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循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
逆转录 |
50℃a |
2 min |
1 |
|
预变性 |
95℃ |
2 sec |
1 |
|
扩增反应 |
95℃ |
|
45 |
|
60℃b |
13 secc |
【注】a. 逆转录：42℃或者50℃均可。
b. 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。
c. 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。
- 适用机型
ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex；
Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™；
Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™；
Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000；
Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96；
Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR
注意事项
1. 实验过程中请使用RNase free耗材。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
