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产品简介
Hifair® Superpro Ⅱ One Step RT-qPCR Master Mix是以RNA为模板进行单重或多重定量PCR反应的一管式全预混试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量PCR在同一反应管中进行，简化了实验操作，降低了污染的风险。
本试剂盒采用了新一代抗体法热启动酶、耐热Hifair® V Reverse Transcriptase和针对一管式全预混RT-qPCR 的特殊缓冲体系，实现引物探针提前预混，配成的反应液使用时只需加入模板即可。同时添加了dUTP/UDG 系统，可有效防止气溶胶污染的风险。
产品信息
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货号 |
11899ES50 / 11899ES60 / 11899ES80 / 11899ES92 |
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规格 |
50 T / 100 T / 1000 T / 10000 T |
组分信息
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组分编号 |
组分名称 |
11899ES50 (50 T) |
11899ES60 (100 T) |
11899ES80 (1000 T) |
11899ES92 (10000 T) |
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11899 |
2×Hifair® Superpro Ⅱ Master Mix |
700 μL |
1.4 mL |
14 mL |
140 mL |
【注】 2×Hifair® Superpro Ⅱ Master mix为Hifair® Superpro Ⅱ One Step RT-qPCR Master Mix 的简写,其中包含dNTPs,dUTP, Mg2+ , stabilizers, enhancers, Hifair® V Reverse Transcriptase、UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase 和 UDGase 等。
储存条件
-25~-15℃保存，有效期1年。
使用说明
- 反应体系（以25 μL为例）
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组分 |
体积（μL） |
终浓度 |
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2×Hifair® Superpro Ⅱ Master Mix |
14 * |
1× |
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Primer & Probe Mix |
1 ** |
0.4 μM |
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模板RNA |
10 *** |
- |
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总体积 |
25 |
- |
* 预混液添加体积为14 μL时，含引物探针的预混效果最好。
** 引物探针的体积为1μL时，含引物探针的预混效果最好。
*** 产品形式为含引物探针的全预混形式时，模板的添加量不建议小于10 μL，否则全预混的稳定性效果和预期可能会有偏差。
【注】1). 已验证过在该产品中加入引物探针的全预混液在37℃放置5天性能不下降。但是不同引物探针的预混稳定性不一致，若全预混稳定性效果较差，建议更换引物探针进一步测试。
2). Primer & Probe Mix 中包含多对引物和探针，通常每条引物终浓度可以根据情况在 0.1-1.0 μM 间进行调整；探针终浓度也可以根据对荧光曲线和荧光增峰的要求在 0.05-0.5 μM范围内进行调整。
3). qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct在20-35之间适宜。
4). 请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头，避免交叉污染和气溶胶污染。
- 参考扩增程序
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循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
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逆转录 |
50℃a |
10 min |
1 |
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预变性 |
95℃ |
5 min |
1 |
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扩增反应 |
95℃ |
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40-45 cycles |
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60℃b |
30 secc |
【注】a. 逆转录：42℃或者50℃均可，时间 10-15 min。
b. 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。
c. 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。
- 适用机型
ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex；
Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™；
Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™；
Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000；
Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96；
Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR
注意事项
1. 实验过程中请使用RNase free耗材。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
