攻略一:了解细胞污染
古人云:知己知彼方可百战百胜,因此了解细胞污染是非常重要的。常见的污染类型有细菌污染、真菌污染、支原体污染、原虫污染、黑胶虫污染、病毒污染以及非同种细胞污染。
1、细菌:细菌在普通倒置显微镜高倍镜下大多可见,根据感染细菌种类不同,呈现不同的外形。其培养基一般会变浑浊、变黄较快,对细胞生状态影响明显。
图1:细胞受到细菌污染图
2、真菌:真菌污染在显微镜下可以看到丝状物,有些真菌开始很像死细胞碎片,呈珊瑚状,随时间转移会长出黑色丝状物。真菌生长的比较慢,一般培养基清亮,不变色,不如细菌易被发现,一旦发现有它的存在,细胞污染就比较严重了,也很难救活。
图2:细胞受到真菌污染图
3、支原体:细菌和真菌造成的污染相对容易发现,然而支原体造成的污染很难察觉,即使生长密度高达107-109CFU/ml,也很难有污染迹象(浑浊、pH变化等)。支原体污染后导致细胞生长变慢,状态变差,不会马上使细胞致死,但会影响细胞内的各种参数,如改变细胞新陈代谢,改变DNA转染效率。支原体感染细胞以后,细胞病变不明显,只是慢慢死去。
4、黑胶虫*:一般低倍镜下观察呈黑色点状,高倍镜下可看见黑色物蠕动,培养液不易变浑浊,在细胞增殖旺盛之后会减少或消失。有时也会出现观测到的运动物明显增多,细胞状态变差,最终死亡。(*对于黑胶虫没有明确的定论,通常认为黑色物是由于多种原因导致细胞状态变差、死亡产生的碎片)
图4:细胞受到黑胶虫污染图
5、原虫*:该污染在显微镜下易观察到,轻微活动,细胞能生长但繁殖速度明显减慢,培养基产生浑浊,细胞状态差,边缘不清楚,细胞不透亮。其能与细胞共生并争夺培养基营养,当到达一定的数量时就会影响到细胞的生长,导致细胞死亡。(*对于原虫污染倾向于是细菌类污染)
图5:细胞受到原虫污染图
6、病毒:由于病毒过小导致培养过程中难以观察。由于在获得原代细胞过程中没有完全除去潜在的病毒,导致病毒污染。尽管病毒污染对细胞原代培养不会造成太大影响,但对下游工业生产如生产疫苗等造成安全隐患,因此需要尽量去除。
图6:病毒入侵猴肝脏细胞层图像(图 源自悉尼大学)
7、非同种细胞污染 :这个主要指不同种类细胞产生的交叉污染,由于细胞培养过程中不同种类细胞株所需器材和溶液没有严格分开,导致细胞交叉污染。据报道,世界上已有多种细胞都被HeLa细胞所污染,致使许多实验宣告无效,因此避免非同种细胞污染也需要引起实验者的重视。
图7:细胞受到非同种细胞污染图
攻略二:污染的预防
细胞污染是比较难处理,因此预防就显的尤为重要。对于预防可从以下几方面着手:
1、 使用抗生素:对细胞培养基使用双抗(在细胞培养基中推荐青霉素的工作浓度为100U/ml,链霉素为0.1mg/ml。)
2、 支原体预防:可以使用支原体预防试剂预防支原体的污染产生。
3、培养器材、用品需消毒灭菌:细胞培养所用器材要清洗消毒,各种溶液灭菌处理。
4、实验操作者的无菌意识
①洗手消毒,穿隔离衣。工作开始时要用酒精棉球擦手并对器皿进行酒精擦拭;
②操作需在生物安全柜内并佩戴口罩;
③尽量使用一次性无菌器材操作,对于多次使用的需实高压灭菌处理。实验完毕用酒精擦拭操作台面。
5、细胞交叉污染的预防
①一次对多种细胞培养操作时,所用器具要严格区分;
②在进行换液或传代操作时尽量避免液体溅出污染其他细胞;
③新购细胞应及时留种冻存,如遇污染可重新复苏。
6、无菌室或细胞房的污染预防
①使用0.1%新洁尔灭对细胞房或无菌室进行全面彻底擦洗;
②使用紫外灯长时间(0.5-2h)照射;
③使用甲醛熏蒸法。
攻略三:污染的去除
细胞培养过程中难免会遇到细胞污染,怎么办??
1、多数污染是较难完全去除,如果污染的细胞非珍贵且有备用,宜舍弃;
2、找到污染源后并清除掉,可复苏冻存细胞或重新购置细胞培养;
3、若污染细胞很珍贵,一时难觅新,针对不同污染小翌给您如下建议。
攻略四:相关推荐
类型 |
产品名称 |
货号 |
规格 |
抗细菌 |
60162ES76 |
100 mL |
|
60230ES07/60 |
3.2/100g |
||
60214ES03/08/25 |
1/5/25g |
||
60223ES25/60 |
25/100mg |
||
抗真菌 |
60238ES01/03 |
100mg/1g |
|
60219ES08 |
5g |
||
60231ES03/08 |
1/5mg |
||
支原体检测 |
40601ES10/20 |
10 /20 assays |
|
40611ES25/60 |
25/100T |
||
支原体去除 |
40605ES02/03/08 |
1/2/10×500ml |
|
40607ES03/08 |
1/5ml |
||
支原体预防 |
MycAway™ Prophylactic (2000×) - Mycoplasma Prevention Reagent |
40608ES03/08 |
1/5ml |
40609ES60 |
100ml |
||
40610ES60 |
100ml |