胰蛋白酶（Trypsin）是一种普遍发现于脊椎动物消化系统的丝氨酸蛋白酶，能水解蛋白，以无活性的胰蛋白酶原（trypsinogen）的形式分泌于胰腺中。其切割肽链的位点主要位于赖氨酸或精氨酸的羧基端（二者紧接脯氨酸的情况除外）。胰蛋白酶包括两个亚基，α亚基（有2个多肽链构成）和β亚基（有1个多肽链构成）。其水解活性可被多种抑制剂抑制，包括：
1）有机磷化合物，如氟磷酸异丙酯；
2）来源于胰腺、大豆、青豆、蛋清的天然胰蛋白酶抑制剂；
3）银离子；4）特定蛋白酶抑制剂，如AEBSF、抗蛋白酶、抑肽酶、DFP、亮抑肽酶、PMSF、TLCK等；
本品是来源于猪胰腺的胰蛋白酶冻干粉，经γ射线处理灭活病毒，酶活≥ 250 units/mg。广泛用于细胞传代，将贴壁细胞从培养板上消化水解下来制备单细胞悬液，常用的工作浓度是0.25-5%（w/v）。
另外，我司还提供其它胰酶产品：
| 产品形式 | 产品货号 | 产品名称 | 产品来源 | 产品优点 | 应用场景 |
| 液体 开瓶即用 省时省力 | 40123ES | 胰酶溶液（无酚红，含EDTA） | 猪胰脏 | 经典配方 价格友好 适用性广 | 大部分连续的强贴壁细胞系 |
| 40124ES | 胰酶溶液（无酚红，无EDTA） | ||||
| 40126ES | 胰酶溶液（含酚红，无EDTA） | ||||
| 40127ES | 胰酶溶液（含酚红，含EDTA） | ||||
| 40134ES | PerfCell Tryzyme™ Express酶，含酚红 | 无动物来源 | 温和解离，保持细胞活性 无需冻融，使用更方便 | 需要确保细胞表面蛋白完整性的原代细胞等要求 | |
| 40135ES | PerfCell Tryzyme™ Express酶，无酚红 | ||||
| 40514ES | 重组胰蛋白酶消化液，无酚红 | 无动物来源 | |||
| 粉末 配制灵活 稳定性高 | 40101ES | 胰蛋白酶 | 猪胰脏 | 价格友好 适用性广 | 常规细胞培养传代和初生组织解离 |
| 20416ES | 重组胰蛋白酶（质谱级） | 毕赤酵母 | 高纯度β-trypsin＞80%，α-trypsin＜20% 高活性>6800 USP units/mg 无外源性病毒污染 无糜蛋白酶等杂酶污染 蛋白质组学酶解漏切率比进口产品低50% | 大部分连续的强贴壁细胞系，其中20416ES具有不自切的特性，尤其适用于蛋白质分析，如蛋白质质谱、测序、肽图谱分析 | |
| 40512ES | 重组胰蛋白酶（药典级） | 大肠杆菌 | 高纯度β-trypsin≥70%，α-trypsin≤20% 活性>3800 USP units/mg 无外源性病毒污染 无糜蛋白酶等杂酶污染 |
注：无酚红款胰酶溶液更适合：流式细胞术（避免酚红干扰荧光信号）；激素相关研究（如乳腺癌细胞、子宫内膜细胞等对雌激素敏感的实验）；无血清培养或特殊培养系统（酚红可能干扰钠-钾平衡或培养基成分）。
| 中文别名（Chinese synonym） | 胰蛋白酶，猪胰脏来源； |
| 英文别名（English synonym） | Trypsin, porcine pancreas; Parenzyme; Tryptar; Trypure; Parenzymol; U-4858; |
| CAS号（CAS NO.） | 9002-07-7 |
| 分子量（Molecular weight） | 23.8 kDa |
| 外观（Apperance） | 白色至类白色粉末 |
| 消光系数（Extinction coefficient） | E1%280=14.3 |
| 等电点（Isoelectric Point） | pH 10.5 |
| 溶解性（Solubility） | 溶于水，几乎不溶于乙醇和甘油 |
| 比活力（Specific activity）* | ＞250 U/mg |
| *活力定义（Unit definition）：The activity causing a change in absorbance of 0.003/minute at 253 nm. | |
使用方法（用于贴壁细胞的消化）
1. 胰酶浓缩液（0.25%）的配置
称取0.25 g胰酶粉末溶于100 mL HBSS（无钙，镁）缓冲液，并调整pH在7.4-7.6范围。此时得到的即0.25%胰酶浓缩液，置于4℃短时间保存，3个月相对稳定。建议分装冻存，利于长期保存。解冻后可能会出现少量沉淀，属于正常现象，不会影响其使用效力。
【注】冻干粉也可溶于其他不含钙镁离子的平衡盐缓冲液如PBS。
细胞的消化可以直接用胰酶溶液，但通常使用的是胰酶-EDTA溶液，因为EDTA是一种II价金属离子螯合剂，能够螯合钙镁离子，减少细胞间的粘附性，从而增强胰酶的活性。
2. 胰酶-EDTA溶液的配制(0.25%(w/v))：
| 无Ca2+、Mg2+及酚红的平衡盐溶液 | To 500 mL |
| 胰蛋白酶 | 1.25 g |
| EDTA | 0.10 g |
3. 贴壁细胞的消化
方法一
1）移除培养板中的培养液，用不含Ca2+、Mg2+的缓冲液清洗单层贴壁细胞，直至清除残余血清，吸除盐溶液。
2）向上述贴壁细胞中加入适量胰蛋白酶-EDTA溶液，至完全覆盖细胞即可。
3）倾斜培养板，吸取胰酶-EDTA溶液，反复吹洗细胞数次，注意消化时间不可过长。
【注】消化时间跟细胞类型、细胞密度、所用血清浓度、胰酶活性、以及消化前细胞培养时间有关。
4）将细胞于室温孵育直至细胞分离，期间可将细胞培养板置于显微镜下观察，避免细胞过度消化，从而避免胰酶对细胞造成的损伤。
5）加入10 mL细胞培养液，轻轻反复吹吸从而将细胞从培养板底尽可能吹离，吹洗时尽量避免气泡的产生。
6）进行下一步操作或将细胞冻存。
【注】操作时务必小心谨慎，同时时刻注意避免交叉污染发生的可能性。
方法二
以25 cm2 T-Flask为例，
1）无菌条件下吸除培养瓶中培养液。
2）加入3 mL冰的胰蛋白酶-EDTA溶液（配方同上）。
3）孵育30 s（或更长，如果需要）。置于低倍镜观察，如果有部分细胞开始变圆脱离培养瓶壁，此时可吸除胰酶溶液，继续孵育至细胞完全脱落。
4）加入10 mL新鲜MEM培养液，可用枪快速的将培养液加入，有助于使细胞脱落；然后使用相同的枪头，轻轻地多次吹洗细胞并混匀后，吸取其中5 mL于一个新的培养瓶中。
5）置培养条件下孵育。
冻干粉2~8℃干燥保存，有效期2年。
[1] Xu W, Che Y, Zhang Q, et al. Apaf-1 Pyroptosome Senses Mitochondrial Permeability Transition. Cell Metab. 2021;33(2):424-436.e10. doi:10.1016/j.cmet.2020.11.018(IF:21.567)
[2] Zhang W, Liu J, Li X, et al. Precise Chemodynamic Therapy of Cancer by Trifunctional Bacterium-Based Nanozymes. ACS Nano. 2021;15(12):19321-19333. doi:10.1021/acsnano.1c05605(IF:15.881)
[3] Peng J, Chen J, Xie F, et al. Herceptin-conjugated paclitaxel loaded PCL-PEG worm-like nanocrystal micelles for the combinatorial treatment of HER2-positive breast cancer. Biomaterials. 2019;222:119420. doi:10.1016/j.biomaterials.2019.119420(IF:12.479)
