Ficoll 400是通过蔗糖和表氯醇的共聚作用，形成的一种高度支化的、完全非离子的聚合物。Ficoll 400聚合物中富含羟基，所以具有很强的亲水性，且极易溶于水。Ficoll 400常被作为密度梯度介质，来分离和隔离真核细胞、细胞器和细菌细胞，以及分离淋巴细胞的稳定剂和分离介质，密度范围可高达1.2 g/mL。除此之外，在免疫学研究中，Ficoll 400还可被用作半抗原载体。在浓缩透析研究中，Ficoll 400分子量较高，无法穿过透析膜，可作为一种有效地浓缩敏感材料。在生理和细胞稳定中，Ficoll 400可以监测血管中的蛋白质排泄。甚至将Ficoll 400加到电泳液中，充当电解质稳定剂。

Ficoll 400分子量大，与蔗糖相比可透析物质含量较低，因此在Ficoll 400中分离细胞，通常不会渗透细胞膜，可以更好地保持细胞功能和形态。

使用方法

可通过不连续和连续梯度离心Ficoll 400，也可用于单位重力分离。不连续梯度离心优点：

a. Ficoll 400密度的突然变化，意味着在不同密度层之间的界面处的急剧变化条带中存在分离的细胞。这样，用移液器就能很容易地移除样品。

b.密度差异很大的细胞只需用两个密度层即可快速分离。这是通过选择密度来实现的，这些密度将阻止一种或多种细胞类型进入较低的相，将这些细胞类型隔离在界面处。

具体密度请参考下表格：

不连续梯度制备：

1.用合适的缓冲溶液或0.25 M的等渗蔗糖溶液配置Ficoll 400，配置的浓度应能分离目标材料，在Ficoll 400中，大多数细胞和细胞器的浮力密度在1.0至1.2 g/mL之间，通常两层梯度即可。

注：配置好的溶液可以储存在冰箱中，但应在室温下使用。

2.将配置好的不同梯度的Ficoll 400放入标准离心管中，制层（约1 cm深），密度最大的层在最下面。

3.小心地将样品放在最上层，用玻璃棒前轻轻搅拌样品和最上面的Ficoll 400层消除之间的界面。离心， 在离心过程中，各种颗粒的密度不同将聚集在Ficoll层内或之间。

4.离心后移除各相，取出目的细胞，用合适缓冲液冲洗，稀释，从分离的细胞和细胞器中除去Ficoll。重复4-5次。

注：

a.可以用蒽酮反应估算样品中残留的Ficoll 400量。

b.在某些情况下，可能需要连续或线性密度梯度来分离样品。对于简单的分离，可以使用不含梯度的均质Ficoll 400溶液，通过逐步增加离心速度来完成分离。

c.密度梯度单位重力沉降法被广泛用于分离对离心敏感的细胞。具有相似密度但不同尺寸的细胞也可以用单位重力法有效分离。

粉末直接室温避光保存，有效期至少5年。

[1] Liu L, Liang L, Yang C, Zhou Y, Chen Y. Extracellular vesicles of Fusobacterium nucleatum compromise intestinal barrier through targeting RIPK1-mediated cell death pathway. Gut Microbes. 2021;13(1):1-20. doi:10.1080/19490976.2021.1902718(IF:10.245)

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