逆转录酶（Reverse Transcriptase，简称RT酶）是一种能够将RNA模板转化为互补DNA（cDNA）的酶。在分子生物学研究中，逆转录酶的应用极为广泛，特别是在分子诊断领域发挥着不可或缺的作用。通过逆转录过程，可以将病毒的RNA基因组转换为cDNA，之后便可以利用如qPCR等技术对其进行扩增和检测。这一特性使得对诸如艾滋病、甲型流感以及乙型流感这类RNA病毒进行准确诊断成为可能。

图1. 逆转录流程示意图

追求更快速、更灵敏且操作更为简便的RT-qPCR分子诊断试剂已成为当前的主要发展趋势。作为RT-qPCR过程中的关键原料之一，逆转录酶需要具备更快的逆转录速度、更高的合成产量以及更好的耐热性能。为了获得更适用于RT-qPCR的逆转录酶，翌圣生物在M-MLV的基础上通过基因改造，开发出RNase H活性更低，热稳定性更高，持续合成能力更强的Hifair^®系列逆转录酶。

图2.逆转录酶作用原理图

翌圣Hifair^®系列逆转录酶

目前翌圣有多种Hifair^®系列逆转录酶，并且可提供各种剂型的产品，包含单酶、预混液，您可以根据实际需求进行选择。下表罗列了翌圣不同逆转录酶的特点和推荐应用。

表1.翌圣逆转录酶选择指南

产品名称（货号）	产品特点	推荐应用
Hifair^® III逆转录酶（11111ES）	热稳定（高达65℃），适合复杂模板	RT-LAMP
Hifair^® V逆转录酶（11300ES）	兼容性强，速度快、合成产量高	一步法RT-PCR/qPCR
Hifair^® Ultra逆转录酶（14604ES）	持续合成能力强，合成长度可达20 kb	RT-PCR/qPCR、RNA-seq、单细胞测序

注：以上所有的酶都有高浓度或无甘油版形式

下面重点介绍一款应用在RT-qPCR分子诊断试剂的逆转录酶：Hifair^® V Reverse Transcriptase。该酶兼容性强，速度快、合成产量高，可耐受高达58℃的反应温度，非常适合用于RT-qPCR分子诊断试剂的开发。

Hifair^® V逆转录酶性能展示

01

可耐受58℃反应温度，适合复杂RNA模板的逆转录

图3.将Hifair^® V Reverse Transcriptase及进口品牌T*的逆转录酶分别在55℃及58℃下孵育30min检测残余酶活。结果显示Hifair^® V Reverse Transcriptase在58℃下孵育30min仍能保持70%活性，远超进口品牌。

02

应用于RT-qPCR检出率优于其他品牌，检出范围：1 pg-1 μg

图4.以1 pg-1 μg（7个梯度）的293T细胞总RNA为模板，使用Hifair^® V one-step RT-gDNA digestion SuperMix for qPCR(Cat#11142)、V*、T*进行逆转录，得到的cDNA进行qPCR定量分析。结果显示，11142ES灵敏度可达1 pg，检出率优于竞品。

翌圣逆转录酶突变体库

翌圣生物利用其ZymeEditor™双向分子酶理性设计与定向进化平台，持续推进逆转录酶的进化研究。至今，我们已经筛选出多种在不同应用场景下表现卓越的逆转录酶突变体，能够全面满足不同客户群体在多样化应用领域的需求。

表2.翌圣逆转录酶突变体选择指南

突变体编号	RDDP	DDDP	Rnase H	TdT	RT产量 (低模板)	RT产量 (常规模板)	最高反应温度(℃)
T* IV	+++	+++	+	+++	++	+++	60
MMLV-01	++	+	+	++++	++	+++
MMLV-02	++	++	+	+++	++++	++++
MMLV-03	+++	++	+	+	++	++++	65
MMLV-04	+++	++	+	++	++	++++	65
MMLV-05	+++	+++	+	++++	+++	++++	65
MMLV-06	+++	++	+++	++	++	+++	65
MMLV-07	+++	+	+	++	++	++++	65
MMLV-08	++++	+++	+	+++	+++	++++	65
MMLV-09	+++	+++	+	+++	++++	++++	65
MMLV-10	+++	++++	+	++++	++++	++++	65
MMLV-11	++	++	+	+++	++++	++++	65
MMLV-12	+++	++++	+	++++	++++	++++	65
MMLV-13	++	+	+	+	+	+++	70
MMLV-14	+++	+	+	+	+	+++	70
MMLV-15	++	+	++	+	+	++	68
MMLV-16	++	+	++	+	+	++	68
RDDP:RNA-dependent DNA polymerase,以RNA为模板合成cDNA的活性 DDDP:DNA-dependent DNA polymerase,以DNA为模板合成DNA的活性 Rnase H:降解DNA-RNA杂交链中的RNA的活性 TdT:Terminal deoxyribonucleotidyl transferase activity,在3'末端非模板化添加脱氧核苷酸的活性				+:极低的 ++:较低的 +++:正常的 ++++:较高的极高的

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