YeaCell^TM Reverse Transcriptase for Single Cell Full Length cDNA利用Oligo (dT)18及TSO Primer引物对少量模板以及低拷贝基因进行逆转录。其产物可以经过通用引物进行PCR反应富集cDNA，然后使用翌圣的酶切建库试剂盒，构建测序文库。本产品采用了在M-MLV(RNase H-)Reverse Transcriptase基础上经过多点突变的全新逆转录酶，具有高逆转录效率，低错配率，高保真度等优势。

 

产品组分

组分编号	名称	13589ES08	13589ES95	13589ES96
13589-A	5×RT Buffer	600 μL	47 mL	60 mL
13589-B	Reverse Transcriptase for Single Cell Full Length cDNA	50 μL	4.8 mL	5 mL

 

运输与保存方法

-25~-15℃保存，有效期1年。

 

适用范围

1.适用于哺乳动物或者没有细胞壁的真核生物细胞的高通量单细胞全长cDNA合成。

2.10 pg~1 μg带有poly（A）的总RNA。

3.本品不适合原核生物总RNA和有降解的RNA，如FFPE RNA。

 

注意事项

1.请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理，推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZap^TM 高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

2. 建库需要的其他试剂需自备或另外购买。

3.本产品仅用作科研用途！

 

使用方法

Step 1 RNA变性

1.按照表1配置反应液：

表1 RNA预变性反应体系

名称	体积（μL）
Oligo (dT)18（20~50 mM）(自备)	1
已裂解的cell or RNA	12
Total	13

2.使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底。于PCR仪上进行如下反应：（热盖80℃ on）70℃，5 min；立即置于冰上3 min。

Step 2 第一链cDNA的合成（1^st Strand Synthesis）

1. 将第一链合成试剂从-20°C取出，室温解冻，颠倒混匀后瞬离。按表2所示，配制第一链cDNA合成的反应液。

表2 第一链cDNA合成反应体系

名称	体积（μL）
上一步	13
5×RT Buffer	4
TSO Primer（20~50 mM）(自备)	1
RNase Inhibitor(40 U/µL)（自备）	1
Reverse Transcriptase for Single Cell Full Length cDNA	1
Total	20

2.使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底。于PCR仪上进行如下反应：（热盖105℃ on）42℃，90 min；70℃，15min；4℃，hold。

3.产物可直接用于二链cDNA合成或于-80℃暂存。

Ver. CN20230612