产品简介

 

Hifair UCF. ME® Advanced Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的全新逆转录酶，与Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比，其速度和稳定性大幅度提高。此外，该产品经过翌圣生物特别研发的精制工艺处理，产品中核酸酶、宿主gDNA以及其他背景菌gDNA残留极低，适用于快速全预混RT-qPCR试剂开发。

 

产品信息

 

货号	14614ES92 / 14614ES97 / 14614ES98
规格	10 KU / 100 KU / 200 KU
单位定义	以Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物，在37℃，10 min内，将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。

 

组分信息

 

组分名称	14614ES92	14614ES97	14614ES98
Hifair UCF. ME® Advanced Reverse Transcriptase (200 U/μL)	50 μL	500 μL	1 mL

 

储存条件

 

-25~-15℃保存，有效期1年。

 

使用说明

 

1.两步法RT-PCR/qPCR（第一链cDNA合成）

1）RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。）

组分	使用量
RNase free ddH2O	to 13 μL
Oligo (dT)18 (50 μM) or Random Primers (50 μM) or Gene Specific Primers (2 μM)	1 μL or 1 μL or 1 μL
模板RNA	Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA: 1-500 ng

65℃加热5 min，迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后，加入下表中的逆转录反应液，并轻轻吹打混匀。

2）逆转录反应体系配制（20 μL体系）

组分	使用量
上一步的反应液	13 μL
5×RT Buffer	4 μL
dNTP Mix (10 mM)	1 μL
Hifair UCF. ME® Advanced Reverse Transcriptase (200 U/μL)	200 U
RNase inhibitor (40 U/µL)	1 μL
RNase free ddH2O	To 20 μL

3）逆转录程序设置

温度	时间
25℃*	5 min
42℃**	15-30 min
85℃***	5 min

*当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略。

**逆转录温度：推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板，可将逆转录温度提高至50-60℃。

***85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。

4）逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。

 

2.一步法RT-PCR/qPCR

该逆转录酶适用于一步法RT-PCR/qPCR，推荐每25 μL反应体系，添加10-40 U逆转录酶，最适逆转录条件为50℃ 15min，也可根据实际情况逐步增加逆转录酶用量，多重体系建议提高酶量。

 

注意事项

 

1. 请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染。

2. 所有操作均应在冰上进行，防止RNA降解。

3. 为保证高效率逆转录，建议使用高质量的RNA样本。

4. 本产品仅用作科研用途。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

 

Ver.CN20241104