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Hifair® III Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的全新逆转录酶，与Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比，其热稳定性大幅度提高，可耐受高达65℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® III Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升，可扩增长达19.8 kb的cDNA。Hifair® III Reverse Transcriptase, 600 U/μL, Glycerol-free第三代耐热逆转录酶（无甘油版）可用于制备冻干制剂、可冻干RT-LAMP试剂等。
产品组分
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编号 |
组分 |
产品编号/规格 |
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11297ES09 (6 KU) |
11297ES12 (12 KU) |
11297ES75 (300 KU) |
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11297 |
Hifair® III Reverse Transcriptase (600 U/μL) |
10 μL |
20 μL |
500 μL |
产品应用
冻干制剂、可冻干RT-LAMP试剂盒。
活性定义
以Poly(A).Oligo(dT)为模板-引物，在37℃，10 min内，将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。
运输与保存方法
冰袋运输。4℃保存，效期6个月。
注意事项
1. 请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染。
2. 所有操作均应在冰上进行，防止RNA降解。
3. 为保证高效率逆转录，建议使用高质量的RNA样本。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
参考操作步骤
1. 体系配置：
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组分 |
组分 |
使用量 |
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13840-A |
10×Bst Buffer |
2.5 µL |
|
13840-C |
100 mmol/L MgSO4 |
2 µL |
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dNTP Mix (100 mmol/L) |
dNTP Mix (100 mmol/L) |
3.5 µL |
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dUTP Mix (100 mmol/L)（可选） |
dUTP Mix (100 mmol/L)（可选） |
0.35 µL |
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11297 |
Hifair® III Reverse Transcriptase (600 U/µL, Glycerol-free) |
0.1 µL |
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10703 |
Murine RNase inhibitor (200 U/µL, Glycerol-free) |
0.2 µL |
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13839（可选） |
Heat Labile UDG (200 U/µL)（可选） |
0.005 µL |
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10×Primersa |
10×Primers |
2 µL |
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13840-Bb |
Bst Ⅱ Plus DNA polymerase (120 U/µL, Glycerol-free) |
0.5 µL |
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RNase free ddH2O |
RNase free ddH2O |
To 25 µL |
【注】：
a. 10×Primers：16 µmol/L FIP/BIP, 2 µmol/L F3/B3, 4 µmol/L Loop F/B each；引物组的比例也可以进行适当的调整。
b. 可根据实验具体情况来调整用量。
2. 反应程序设置
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温度 |
时间 |
作用 |
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37℃ |
2 min |
消化 |
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65℃ |
30-60 mina |
逆转录和恒温扩增 |
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85℃ |
10 min |
灭活 |
【注】：
a. 探针法的引物可以直接选择目的通道收集荧光，1 min采集一次荧光。染料法可以额外添加货号为13841的染料，通道选择SYBR，1 min采集一次荧光。
相关产品
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产品名称 |
货号 |
规格 |
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14402ES92 |
8,000 U |
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14403ES20 |
20,000 U |
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15441ES03 |
1 mL |
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13762ES60 |
100 T |
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|
13906ES65 |
100 T |
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|
13995ES60 |
100 T |
|
|
10707ES60 |
100 U |
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|
11302ES12 |
10,000 U |
|
|
10703ES05 |
2 KU |
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10701ES05 |
2 KU |
|
|
11300ES92 |
10,000 U |
HB220720
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