Hifair® AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit

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产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

 

Hifair® AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit是基于Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit开发的快速逆转录试剂盒,适用于PCR扩增以及RT-qPCR实验。与Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit相比,具有稳定的检出率、特异性、产量保证,且反转录总时长最快可低于6分钟,大大缩短了实验时间。

该试剂盒包含gDNA Digester Mix,可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染,保证后续结果更加可靠。该试剂盒提供两种cDNA合成引物:Random Primers N6Oligo (dT)18,用户可根据需要,选择Random Primers N6Oligo (dT)18Gene Specific Primers作为逆转录引物,合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。

 

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

11149ES1010 T

11149ES60100 T

11149-A

4× Hifair®AdvanceFast SuperMix

50 μL

500 μL

11149-B

5×gDNA Digester Mix

20 μL

200 μL

11149-C

Random Primers50μM

20 μL

200 μL

11149-D

Oligo d(T)18 Primers50μM

20 μL

200 μL

11149-E

RNase-free Water

200 μL

1 mL* 2

 

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃保存,有效期12个月。逆转录产物可立即用于后续反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。

第一链cDNA合成操作步骤

一、若实验需要去除残留基因组DNA

1. gDNA消化

RNase-free离心管中配制如下混合液,用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min

组分

使用量

RNase-free H2O

To 10 μL

5×gDNA Digester Mix

2 μL

Total RNA

10 pg -5 μg*

or mRNA

10 pg-500 ng*

 

2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

组分

使用量

上一步的反应液

10 μL

4×Hifair®AdvanceFast SuperMix

5 μL

Oligo d(T)18 Primers50μM

2 μL

or Random Primers (* for qPCR)50μM

or 2 μL

or Gene Specific Primer (2 μM)

or 1 μL

RNase-free Water

To 20 μL

】:1)引物投入量可根据模板投入量调整,如果逆转录产物用于qPCR实验,推荐Oligo (dT)18Random Primers 1:1混合使用

2)建议先加入4×Hifair®AdvanceFast SuperMix 混匀后再加入逆转录引物以保证引物不受gDNA Digester影响。

3)体系配制完成后,请用移液器轻轻吹打混匀。

 

3. 逆转录程序设置

温度

时间

55℃

5 min

85℃

5 s

 

二、若实验无需去除基因组DNA

1. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

组分

使用量

4×Hifair®AdvanceFast SuperMix

5 μL

Oligo d(T)18 Primers50μM

2 μL

or Random Primers (* for qPCR) 50μM

or 2 μL

or Gene Specific Primer (2 μM)

or 1 μL

Total RNA

10 pg -5 μg

or mRNA

10 pg - 500 ng

RNase-free Water

To 20 μL

 

2. 逆转录程序设置

温度

时间

55℃

5 min

85℃

5 s

】: 1)建议Total RNA的投入量不超过2 μg。如果目的基因的表达丰度低,可增加投入量至最多5μg Total RNA

2)对于高GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到60℃

3)本产品可合成14 kb以下的cDNA序列,如需得到更长的cDNA产物,可适当延长逆转录时间。

 

注意事项

1)所有操作均应在冰上进行,且操作过程应避免RNase污染。

2)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

3)本产品仅作科研用途!

 

HB221108

400-6111-883