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产品简介
Hifair® V C58P2 Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus)是以 RNA 为模板进行多重定量 PCR 反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量 PCR 在同一反应管中进行，简化了实验操作，降低了污染的风险。
本试剂盒利用耐热 Hifair® V Reverse Transcriptase 高效合成第一链 cDNA，并利用 UNICON® HotStart Taq DNA
Polymerase 进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的 MP Buffer，Enzymes Mix 等，缓冲液中已含有 Mg2+ 和 dNTPs, 以及有效抑制非特异性 PCR 扩增的因子和提升多重 qPCR 反应扩增效率的因子，能够在保证引物扩增效率的同时，进行多重扩增反应。此外，该预混液添加了 dUTP/UDG 系统，可有效防止气溶胶污染。
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组分编号 |
组分名称 |
13650ES50 (50 T) |
13650ES60 (100 T) |
13650ES80 (1000 T) |
13650ES92 (10000 T) |
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13650-A |
2×Hifair® V C58P2 MP Buffer |
750 μL |
1.5 mL |
15 mL |
150 mL |
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13650-B |
Hifair® V C58P2 Enzyme Mix |
60 μL |
120 μL |
1.2 mL |
12 mL |
组分信息
【注】1. 2×Hifair® V C58P2 MP Buffer 为Hifair® V C58P2 Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer 的简写,其中包含dNTPs,dUTP, Mg2+ , stabilizers等。
2. Hifair® V C58P2 Enzyme Mix 主要包含有耐热 Hifair® V Reverse Transcriptase, UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase, RNase inhibitor, UDGase。
储存条件
-25~-15℃保存，有效期18个月。
使用说明
- 反应体系（以30 μL为例）
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组分 |
体积（μL） |
终浓度 |
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2×Hifair® V C58P2 MP Buffer |
15 |
1× |
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Hifair® V C58P2 Enzyme Mix |
1.2 |
- |
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Primer/Probe Mix (2.5 μM) |
3 |
0.25 μM |
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模板RNA |
1-10 |
- |
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RNase Free H2O |
to 30 |
- |
【注】使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。
- 引物探针混合液浓度：Primer/Probe Mix 中包含多对引物和探针，通常每条引物终浓度可以根据情况在 0.1-1.0 μM 间进行调整；探针终浓度也可以根据对荧光曲线和荧光增峰的要求在 0.05-0.5 μM 范围内进行调整。
- 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。
- 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头；避免交叉污染和气溶胶污染。
- 参考扩增程序
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循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
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逆转录 |
50℃a |
20 min |
1 |
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预变性 |
95℃ |
5 min |
1 |
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扩增反应 |
95℃ |
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40-45 cycles |
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60℃b |
30 secc |
【注】a. 逆转录：42℃或者55℃均可。
b. 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。
c. 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。
- 适用机型
ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex；
Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™；
Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™；
Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000；
Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96；
Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR; SLAN 96S, 96P.
注意事项
1. 实验过程中请使用RNase free耗材。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20241108
