产品简介

 

本试剂盒通过竞争法测定样本中载脂蛋白B（ApoB）的浓度。首先，将样本加入到预先涂有特异性抗体的酶标孔中，随后加入生物素标记的抗原。在37℃下孵育30 min，样本中的ApoB抗原与生物素标记的抗原会竞争性地结合固相抗体，形成免疫复合物。孵育完成后，用PBST缓冲液洗涤，去除未结合的生物素标记抗原。接着加入亲和素-辣根过氧化物酶（HRP）复合物，再次在37℃孵育30 min，使亲和素-HRP与生物素标记的抗原结合。洗涤后，加入四甲基联苯胺（TMB）底物，结合的HRP会催化TMB显色，呈现蓝色。在酸的作用下，蓝色转变为黄色，该黄色产物在450 nm波长处有吸收峰。最终，通过测定吸光值来反映样本中ApoB的浓度，吸光值与ApoB浓度呈负相关。

翌圣生物提供大鼠载脂蛋白B(ApoB)ELISA试剂盒（60411ES）、小鼠载脂蛋白B(ApoB)ELISA试剂盒（60412ES）和人载脂蛋白B(ApoB)ELISA试剂盒（60413ES）。

 

产品信息

 

货号	60411ES48/60411ES59
规格	48 T/96 T
检测时长	1.5 h
检测范围	2μg/mL–600μg/mL
板内差	小于10%
板间差	小于12%

 

组分信息

 

组分编号	组分名称	48 T	96 T	储存条件	备注
60411ES-A	酶标板	1×48	1×96	-25～-15℃	Part1
60411ES-B	标准品(冻干粉)	2支(1支加150 μL标准品稀释液溶解)	2支(1支加150 μL标准品稀释液溶解)	2～8℃	Part2
60411ES-C	标准品/样品稀释液(0.05 M的PBS)	3 mL	6 mL	2～8℃
60411ES-D	浓缩生物素抗原(冻干粉)	1支	1支	-25～-15℃	Part1
60411ES-E	浓缩亲和素-HRP	50 μL	100 μL	-25～-15℃	Part1
60411ES-F	生物素抗原稀释液	3 mL	6 mL	2～8℃	Part2
60411ES-G	亲和素-HRP稀释液	2.9 mL	5.9 mL	2～8℃
60411ES-H	显色剂A液	3 mL	6 mL	2～8℃
60411ES-I	显色剂B液	3 mL	6 mL	2～8℃
60411ES-J	终止液(2 M的H2SO4，需小心开启)	3 mL	6 mL	2～8℃
60411ES-K	浓缩洗涤液(含0.15% 吐温-20的PBST)	20 mL(25X)	20 mL(25X)	2～8℃
60411ES-L	封板膜	2片（48）	2片（96）	2～8℃
60411ES-M	密封袋	1个	1个	2～8℃

备注：

1. 浓缩洗涤液在低温下会有少量盐类析出，稍微加温后即会消失，不影响使用。
2. 酶标板为真空包装，板条可以拆卸，拆开以后如一次不能用完，可放入提供的密封袋中，放入干燥剂，2～8℃保存，在一个月之内仍然有效。
3. 试剂不能反复冻融。

 

储存条件

 

2～8℃保存，有效期6个月。

 

使用说明

 

1.试剂准备

1）使用前所有试剂应置于室温平衡至少30 min。

2）本试剂盒可以直接加样，如浓度过高，可以进行适当比例的稀释，计算时应将结果乘以稀释的倍数，建议先做预实验，以确定稀释倍数(以样本测定值在标曲范围内为准)。

3）洗涤液为25倍浓缩液，使用前需将所有洗涤液倒入500 mL或1 L的烧杯中，用双蒸水定容到500 mL即为工作液，或可按比例1:24配制需要量。

4) 标准品的稀释：每支标准品加150 μL标准品稀释液到标准品干粉管中，然后漩涡混匀30s，充分溶解，避免气泡，即为800μg/mL的标准品原液(24h内用完)。取5支干净的EP管，每管加120μL的标准品稀释液，分别标记上400μg/mL，200μg/mL，100μg/mL，50μg/mL，25μg/mL。取120μL标准品原液加入标记400μg/mL的管中，混匀后同样取出120μL，加入下一管，以此类推直至最后一管。

5) 生物素抗原的稀释：将浓缩生物素抗原(冻干粉)低速(2000-4000转/分钟)离心(2-5 min)，然后抽取生物素抗原稀释液1 mL到浓缩型生物素抗原(冻干粉)中，漩涡混匀15s，至冻干粉完全溶解，然后将所有液体倒入稀释液瓶中，漩涡混匀后即为生物素抗原工作液(一周内用完)。

6) 亲和素-HRP的稀释：将亲和素-HRP低速(2000-4000转/分钟)离心(2-5 min)，使浓缩液全部沉到管底，将浓缩亲和素-HRP全部转移到稀释液瓶中，漩涡混匀后即为亲和素-HRP工作液(一周内用完)。

2.样本前处理

标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-25～-15℃保存，但应避免反复冻融。

1）血清

室温血液自然凝固10-20 min，2000-3000转/分，离心20 min左右。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2）血浆

根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20 min后，2000-3000转/分，离心20 min左右。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

3）尿液

用无菌管收集，2000-3000转/分，离心20 min左右。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4）细胞培养上清

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。2000-3000转/分，离心20 min左右。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS (pH 7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/mL左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。2000-3000转/分，离心20 min左右。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5）组织标本

切割标本后，用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2～8℃的温度。按重量体积比1 g:9 mL的比例加入9倍体积的PBS(pH7.4，41403ES)，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。2000-3000转/分，离心20 min左右。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

3.洗板方法

1) 手工洗板：先甩洗去酶标孔中的的液体，倒扣在吸水纸上拍干，然后每孔加入300 μL稀释好的洗涤液，轻轻摇晃30s，然后甩掉，在吸水纸上拍干，重复4-5次。

2) 洗板机洗板：洗板机洗板比较便捷，但应操作熟练后使用。

4.详细操作程序

1) 使用前将试剂盒在室温下平衡半小时。

2) 空白孔：空着先不加（只在最后和其它孔一起加显色剂A、B和终止液用于调零)。

3) 标准品孔：每孔加入稀释好各浓度的标准品50 μL，然后加入生物素抗原工作液50 μL。

4) 零孔：加入标准品稀释液50 μL，然后加入生物素抗原工作液50 μL。

5) 样品孔：加入样品50 μL，然后加入生物素抗原工作液50 μL。

6) 轻轻摇晃，盖上封板膜，37℃培养箱中孵育30 min。

7) 将25倍浓缩洗涤液用蒸馏水25倍稀释后备用。

8) 第一次洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30s后弃去，如此重复5次，拍干。

9) 加入50 μL亲和素-HRP工作液到零孔、标准品孔和样品孔中，轻轻摇晃，盖上封板膜，37℃培养箱中孵育30 min。

10) 第二次洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30s后弃去，如此重复5次，拍干。

11) 显色：每孔先加入显色剂A 50 μL，再加入显色剂B 50 μL，酶标板覆膜，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 min左右。 提示：注意不定时观察孔板，根据每孔显色情况酌情缩短或延长孵育时间，但不可超过30 min。当标准孔出现明显梯度时（前4个孔出现明显蓝色梯度），即可终止。

12) 终止：每孔加入终止液50 μL。（注：终止液的加入顺序应尽量与显色液的加入顺序相同）

13) 测定：以空白孔调零孔，在酶标仪450 nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后10 min以内进行。

14) 计算：根据浓度和OD值算出标准曲线的回归方程，建议用专用计算软件进行计算。

浓度	Blank	S5	S4	S3	S2	S1	S0
OD值	VB	V5	V4	V3	V2	V1	V0
校准值	VB-VB	V5-VB	V4-VB	V3-VB	V2-VB	V1-VB	V0-VB

5.操作总结

 

注意事项

 

1.请勿将本试剂盒的试剂与其他公司的试剂混用以免影响实验结果。

2.需要消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

3.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5.本产品仅作科研用途！

 

相关产品推荐

产品	货号	规格
PBS(1×)细胞培养级	41403ES	500 mL
PBS(10×)细胞培养级	41404ES	500 mL
10× PBST缓冲液	60146ES	500 mL/500 mL×2

 

 

Ver.CN20250219